血清总蛋白测定 双缩脲比色法的原理 有谁知道？

大鼠血清总蛋白含量测定（双缩脲比色法）
一．原理
蛋白质是由许多氨基酸通过肽键相互结合而成。肽键在碱性溶液中能与铜离子作用产生紫红色络合物。测定紫红色络合物的吸光度，能计算总蛋白的含量。
二．目的
1．掌握血清总蛋白含量的测定方法。
2．观察阴虚大鼠模型血清总蛋白含量的变化。
3．观察中药对阴虚大鼠模型血清总蛋白含量的变化。
三．试剂
1．总蛋白试剂
硫酸铜0.12 mmol/L
酒石酸钾钠21.1 mmol/L
氢氧化钠0.75 mmol/L
2．蛋白标准液：血清白蛋白50g/L
四．材料
1．试管（100*16mm）3支
2．移液器（P20ul、P200ul、P1000ul）各1把
3．石英比色皿（1ml）4只
五．测定方法
单位: ul

空白管（b）
标准管（std）
测定管（s）

H2O

蛋白标准液（50.0g/L）

样品

总蛋白试剂
10.5

－

－

1050
－

10.5

－

1050
－

－

10.5

1050

混匀，室温放置30分钟，以空白管校零，测定550nm处的吸光度。
六．计算
总蛋白含量（g/L）＝（测定管吸光度/标准管吸光度）×标准液浓度
七．注意事项
1．室温放置30分钟后必须立即测定吸光度，否则吸光度会增加。
2．实验试剂用量较少，所以加量一定要仔细、准确。

蛋白质在碱性溶液中与硫酸铜作用形成紫蓝色络合物的呈色反应。在540nm 波长处有Z大吸收。可用于蛋白质的定性和定量检测。