生化试剂中的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳为什么可以用于测定蛋白质的分子量?
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生化试剂中的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳为什么可以用于测定蛋白质的分子量?
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- 疯狗图片 2016-10-09 08:50:50
- 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时,它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小 和形状等因素。如果加入一种生化试剂使电荷因素消除,那电泳迁移率就取决于分子的大小,就可以用电泳技术测定蛋白质的分子量。1967年,Shapiro等发现阴离子去污剂 十二烷基硫酸钠(SDS)具有这种作用。当向蛋白质溶液中加入足够量索莱宝的SDS和巯基乙 醇,SDS可使蛋白质分子中的二硫键还原。由于十二烷基硫酸根带负电,使各种蛋白 质—SDS复合物都带上相同密度的负电荷,它的量大大超过了蛋白质分子原的电荷量, 因而掩盖了不同种蛋白质间原有的电荷差别,SDS与蛋白质结合后,还可引起构象改 变,蛋白质—SDS复合物形成近似“雪茄烟”形的长椭圆棒,不同蛋白质的SDS复合物 的短轴长度都不一样,约为18A,这样的蛋白质—SDS复合物,在凝胶中的迁移率,不 再受蛋白质原的电荷和形状的影响,而取决于分子量的大小,因而SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可以用于测定蛋白质的分子量。
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