仪器百科

高盐沉淀蛋白质醇沉淀方法和同类核酸的分离

核酸提取仪

核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来使得样本核酸提取工作自动完成的仪器。其在、输血安全、法医学鉴定、疾病控制ZX、临床疾病诊断、生物学研究等多种领域得到广泛地应用。


高盐沉淀蛋白质醇沉淀方法

高盐沉淀蛋白质/醇沉淀方法同样也非常不错的,相比于PC抽提方法,该方法将PC抽提的所有缺点几乎克服了,除了可能会有较低的纯度的稳定性。蛋白质的去除能够更轻松、更快。纯度(蛋白质残留)不够稳定是其不足,能够用于大规模抽提是其所伴随的好处。在4℃蛋白质会有更好一些蛋白质的沉淀效率。


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同类核酸的分离:

DNA混合物的分离:

常用磷酸钙、ECTEOLA-纤维素、DEAE-纤维素和甲基化白蛋白柱层析,逆流分溶,梯度离心等方法进行变性或降解的DNA和天然的分离。一个具有生物活性高度提纯的DNA制品应具有如下标准:

1.RNA不含有

2.水溶液具有高的粘度并有流动双折射作用,固体为纤维状.

3.具有生物活性

4.具有电泳超离心中单分散性和均一性

5.多糖和蛋白质不含有

6.可透析的小分子杂物不含有

7.在pH7时,E(P)在6600左右,紫外吸收Zda值在257~261μm之间


RNA混合物的分离:

有各类RNA和某些已降解的RNA混杂物包含在经过提取的初步纯化的RNA制品中,在进一步纯化时,柱层析、梯度离心及逆流分溶等方法通常被应用。例如使用tRNA与rRNA的分离用吸附于硅藻土表面的甲基化白蛋白柱吸附后,使用蔗糖梯度(顶部5%浓度,底部20%浓度)离心法分开或者通过不同梯度氯化钠溶液洗脱。mRNA有比较快的代谢速度,在哺乳动物中平均寿命约为几小时至十几小时。在细菌中平均寿命为90min。DNA-琼脂柱以及密度梯度离心法常常被使用来分离。在对rRNA制备时,因为共沉作用,常常有mRNA混入,为了使二者分开,通常能够使用萘-1,5-二磺酸处理。一般在磷酸缓冲液-甲酰胺-异丙醇系统下采用逆流分溶法进行各种tRNA的提纯,有着比较好的分离效果。


2005-08-16
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