基因组DNA提取方法CTAB法

核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来使得样本核酸提取工作自动完成的仪器。其在环境微生物检测、食品安全检测、输血安全、法医学鉴定、疾病控制ZX、临床疾病诊断、生物学研究以及畜牧业等多种领域得到广泛地应用。下面就让小编带你了解一下CTAB法。

CTAB法原理：

CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）是一种阳离子去污剂，能够将细胞膜溶解，并且和核酸形成复合物。在高盐溶液中，该复合物是可溶的，利用有机溶剂抽提，将多糖、酚类以及蛋白等杂志出去，之后将乙醇加入，就能够分离出核酸。

CTAB提取缓冲液的经典配方以及作用

1、终浓度100mM Tris-HCL(pH 8.0)

作用：为了避免核酸被破坏，Tris-HCL(pH 8.0)提供了一个缓冲环境。

2.终浓度20mM EDTA(pH 8.0)

作用：EDTA螯合锰离子或者镁离子，使DNase活性得以YZ。

3.终浓度0.4M NaCl

作用：NaCl提供了一个高盐环境，充分溶解DNP，在液相中存在。

4.终浓度2％（W/V）CTAB

作用：CTAB使细胞膜溶解，并且和核酸结合，方便分离核酸。

5.使用前加入0.1％（V/V）β-巯基乙醇

作用：β-巯基乙醇为抗氧化剂，使酚氧化成醌得到有效的避免，使褐变得以避免，易于除去酚。

CTAB提取缓冲液的改进配方

CTAB终浓度由2％（W/V）CTAB变为3％（W/V）CTAB，新添加终浓度3％（W/V）PVP40。

终浓度3％（W/V）PVP40

作用：PVP是酚的络合物，可以和酚形成一种不溶的络合物质，使多酚被有效地除去，从而使DNA中酚的污染减少。同时它还可以与多糖结合，使多糖被有效地除去。

CTAB法实验流程

植物材料-液氮研磨-细胞裂解-抽提-上层溶液-核酸沉淀-离心洗涤-干燥溶解-DNA溶液