高三生物 从基因文库中提取基因需要限制酶吗？

现在的生物已经这么难了吗……o(╯□╰)o

这道题 的A肯定是对的。
选项B有争议。是这样的，一般从文库中调取基因，不会直接用限制酶酶切，而是首先需要pcr扩增，而后连接到所需的载体上。当然，如果酶切位点合适，质粒又充足，直接酶切调取也是可以的（几率非常小）。
其次，真核生物的基因都有外显子和内含子，一般需要将内含子去除。而基因文库也不知道是DNA文库还是cDNA文库，如果是cDNA文库，就可以直接进行调取，不然就要先提取mRNA然后反转录得到cDNA，保证是没有内含子的基因序列，才能表达。

基因文库只是一个资料库，里面有数据，比如这段基因是：CCATTGCAT。。。那么直接按照这个顺序进行人工合成就可以了。基因文库不是一段生物现实基因，而是资料。明白了吗？

答案A是可行方案的前半部分，后面应该包括把扩增到的基因B克隆到双元载体，转基因到玫瑰花细胞的操作；
答案B，如果已经从基因文库中筛选出含有基因B的克隆，可以用限制性核酸内切酶酶切获取基因B片段，实际上，对序列未知的情况下，这样得到的序列比逆转录后扩增更少突变，能更准确得到基因B的序列；
答案C，通常用T4 DNA连接酶将基因B与质粒连接，利用DNA聚合酶来连接是不行的，但如果把答案中的连接理解为重组克隆，现在是有办法用DNA聚合酶克隆的，但用这种方法一般是转到有修复缺刻功能细菌，直接转玫瑰细胞估计不行，所以该答案是错的；
答案D，错误。基因B如果拿到没提，即使已经拿到并克隆到载体上，也应该转化大肠杆菌后通过三亲本杂交或二亲本杂交把基因转入农杆菌，或直接把DNA电击转入农杆菌。因为大肠杆菌不能完成感染并把基因转入玫瑰细胞。
再从题干提示基因B序列已知，那么简单的方法是答案A逆转录后PCR扩增的路线，也是出题人想要的答案。其次是基因文库的序列含有内含子，虽然都是植物，但不一定有相同的转录后加工系统，而且含有内含子的序列往往长很多，不利于完成后面的克隆表达实验操作。所以答案B不是一个好的路线，特别是序列已经知道，没有必要再这么做。

因为基因文库里面的基因是全部的基因B 有内含子也有外显子 而表达蛋白的只是外显子片段 所以diyi个经过mRNA逆转录得到的片段才是只含有外显子的片段，才可以扩增出正确的表达型的基因B。
B错在基因文库上。