2.向菌体沉淀中加入200µl缓冲液GA,振荡至菌体彻底悬浮。注意:对于较难破壁的革兰氏阳性菌,可略过第2步骤,加入溶菌酶进行破壁处理,具体方法为:加入180µl缓冲液(20mMT... 2. 向菌体沉淀中加入 200 µl 缓冲液 GA,振荡至菌体彻底悬浮。
注意:对于较难破壁的革兰氏阳性菌,可略过第 2 步骤,加入溶菌酶进行破
壁处理,具体方法为:加入 180µl 缓冲液(20mM Tris, pH8.0;2mM
Na2-EDTA;1.2% Triton;终浓度为 20mg/ml 的溶菌酶(溶菌酶必须用溶菌
酶干粉溶解在缓冲液中进行配制,否则会导致溶菌酶无活性),37℃处理 30
分钟以上。
这个里面的缓冲液是不是需要自己配制?如果需要,如何配制?
一般DNA提取试剂盒中都是配好的,也可以找替代的缓冲液。如果没有现成的也可以根据参考的配置:Tris—盐酸缓冲液,基本的工具书中都有,溶菌酶也该是用液体低温分装的,根据说明滴加!