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急求:有谁知道蛋白质电泳染色时的银染配方呀?谢谢你的帮助

安妮宝贝19905 2012-03-18
有谁知道蛋白质电泳的银染配方和步骤吗?谢谢你了
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伍祖加
我的配方如下,仅供参考:
1. 固定:30min或过夜
100ml 乙醇 40% 乙醇
25ml冰醋酸 10% 冰醋酸
加水到250ml
2. 致敏:30min
300ml 乙醇 30% 乙醇
68g 乙酸钠(或112.8g 三水乙酸钠)
2g硫代硫酸钠
加水到终体积1000ml
3. 水洗:3 x 5min
4. 银染:20min
0.625g AgNO3
加水到终体积250ml
5. 水洗: 2 x 1 min (准确掌握时间,水洗时间长显色速度慢,点的颜色浅)
6. 显色:视情况而定
6.25 g Na2CO3
100 ul 37% 甲醛 (在使用前加入)
可加入 1g/L Na2S2O3 50微升以降低背景(在使用前加入)
加水到终体积250ml

Sweet silver:
硼酸 3.1克 100 mM
NaOH 3 克 150 mM
加水到终体积500 ml。
用前取sweet 225 ml加1g/L Na2S2O3 200微升,40%葡萄糖25 ml。
7. 终止:10min
7.3g EDTA.Na2.2H2O 或者2g 甘氨酸
加水到终体积500ml
8. 保存:1% 冰醋酸,4 ℃
4 0 2012-03-24 0条评论 回复
遍地都是社会哥
上海生工有现成的产品 编号为BSP021 BSP027 BSP029S-N
任你选择。
17 0 2012-03-19 0条评论 回复
jxsrzhb521
分子克隆实验指南里面有 我用过。不过自己配置肯定不如买现成的产品好用
15 0 2012-03-19 0条评论 回复
沾化人lv
银氨染色法:
1、取二块双向蛋白凝胶,用500mL固定液(40%甲醇+10%乙酸)固定30min

2、用双蒸水冲洗3次,时间分别为3min、5min和3min

3、然后用500mL AgNO3染色液(500mL 中含有3.6% NaOH 10.5mL、20% AgNO3 9 mL和5mL氨水)染色32-33min

4、用双蒸水冲洗4次,时间分别为3min、4min、4min和1min

5、然后用500mL显色液(500mL中含有1%柠檬酸2.5mL和甲醛250μL)显色5-12min(显色时应摇动,显色时间可灵活,一般采用边显色边观察)

6、500mL 5%醋酸终止反应5min,然后用ddH2O冲洗2-3次

注意:双向银染上样蛋白总量为40-250μg。
9 0 2012-03-28 0条评论 回复
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