解决方案

GB 31656.11-2021前处理关键点和要点 水产品中土霉素、四环素、金霉素和多西环素残留量的测定

 一法 高效液相色谱(替代GB/T 22961-2008)

 

原理

试样中土霉素、四环素、金霉素和多西环素的残留经柠檬酸缓冲溶液提取,固相萃取柱净化,液相色谱荧光检测器测定,外标法定量。


8.1 提取 取试料5 g(准确至±0.02 g),加柠檬酸缓冲液20 mL,涡旋震荡2min,超声10 min, 6000 r/min离心10 min,取上清液,残渣加柠檬酸缓冲液10 mL,重复提取两次,合并三次上清液,待净化。

关键词:GB 31656.11-2021与GB/T 22961-2008在提取过程中的区别

要点:


8.2 净化 固相萃取柱依次用甲醇10 mL、水10 mL、柠檬酸缓冲液5 mL活化,取备用液过柱,用甲醇溶液10 mL、水10 mL淋洗,抽干,加甲醇10 mL,洗脱,收集洗脱液,40℃氮气吹干, 残渣加磷酸二氢钾溶液1.0 mL使溶解,超声1min,0.22 μm水相滤膜滤过,供高效液相色谱测定。

关键词:GB 31656.11-2021与GB/T 22961-2008在净化过程中的区别

要点:


 二法 液相色谱-串联质谱法

 

原理

试样中土霉素、四环素、金霉素和多西环素的残留用 Na2EDTA-Mcllvaine 缓冲溶液提取,醋酸铅沉淀,正己烷除脂,固相萃取柱净化,液相色谱-串联质谱测定,外标法定量。


18.1 提取 取试料2 g(准确至±0.02 g),加Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液6 mL、醋酸铅溶液2 mL, 涡旋混合1 min,超声10 min,4℃以8000 r/min离心5 min,取上清液。残渣分别用Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液5 mL,重复提取两次,合并3次提取液。

关键词:醋酸铅

要点:

Ø  提取过程增加了醋酸铅沉淀,正己烷脱脂。醋酸铅是一种常用的蛋白沉淀试剂,可以更有效去除动物组织提取液中的蛋白。同样,与方法一一样,提取3次。


18.2 净化 向上述提取液加正己烷10 mL,涡旋1 min,8000 r/min离心5min,取下层溶液,加Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液至20.0 mL,备用(鳗鲡、蟹和海参样品,需按照上述方法净化两次)取固相萃取柱依次用甲醇、水各5 mL活化,取备用液10.0 mL过柱,控制流速约1 mL/min, 用水、甲醇溶液各5 mL淋洗萃取柱,弃去流出液,减压抽干5 min。加甲醇-乙酸乙酯5 mL洗脱,收集洗脱液,40 ℃氮气吹至近干,加甲酸溶液(0.1%)-乙腈1.0 mL溶解残渣,涡旋混匀, 滤过,为防药物变性,需及时供液相色谱-质谱仪测定。

 

关键词:过柱速度慢

要点:

Ø  GB 31656.11四环素类测定,加入醋酸铅后,会出现过柱困难。主要是样品提取过程中把蛋白等杂质去除不太干净,需要充分地离心;建议离心时间稍微长一点,低温高速多次离心,快速过滤。

 

 

关键词:GB 31656.11-2021方法二和方法一净化过程的区别

要点:

Ø  方法二选择的HLB小柱是小规格60mg/3   mL (PN:AN60A002),方法一是500mg规格。

Ø  另外,方法二在上柱之前加入了正己烷脱脂,由于使用的是小规格的小柱,需要尽可能去除干扰物,还有,方法二洗脱液是甲醇-乙酸乙酯,混合溶液来做洗脱液。Z后,甲酸-乙腈复溶解,实现溶剂转换。



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