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北京纳鸥科技有限公司时间:
2022-06-30行业:
食品/饮料/烟草 肉制品原理
试料中残留的氟苯尼考与氟苯尼考胺,用碱化的乙酸乙酯提取,正己烷除脂,固相萃取柱净化,液相色谱-串联质谱法测定,内标法定量。
8.1 提取 称取试料2g(准确到±0.02g),于50 mL离心管中,加氘代氯霉素内标溶液100 μL,涡动混匀,静置15 min。加乙酸乙酯-氨水溶液10 mL,涡动1 min,3000 r/min离心5 min,取上清液于100 mL鸡心瓶中,残渣重复提取两次,合并3次提取液。鸡心瓶中加5%乙酸2 mL,振摇混匀,于40 ℃水浴中浓缩至1.5 mL。转至另50 mL离心管中,用5% 乙酸2 mL洗涤鸡心瓶,洗涤液转至同一离心管,加正己烷5 mL脱脂,涡动1 min,3000 r/min离心5 min弃上层,下层提取液重复脱脂一次,备用。
关键词:碱性条件下提取,提取3次
要点:
氟苯尼考及氟苯尼考胺,在碱性条件下,更加容易被有机溶剂提取,可以获得满意的提取回收率。
碱化的乙酸乙酯提取3次,浓缩后正己烷除脂。
关键词:5%乙酸
要点:
在蒸发前,在鸡心瓶中加5%乙酸。有助于保护氟苯尼考胺在操作过程(合并、浓缩)中的回收率。
8.2 净化 MCX 固相萃取柱依次用甲醇2 mL和水2 mL活化。备用液过柱,用5 %乙酸2 mL淋洗, 用10 %氨甲醇5 mL洗脱。收集洗脱液,于40 ℃氮气吹干。用30 %乙腈水溶液500 μL溶解残余物,滤膜过滤,供超高效液相色谱-串联质谱测定。
关键词:GB 31658.5-2021与GB/T 22959净化步骤区别
要点:
GB/T 22959之前的氟苯尼考检测标准,净化采取的是液液萃取法。
对于样品基质比较复杂的情况,干扰物质较多,单纯的液液萃取和脱脂净化,不够理想的时候,使用SPE小柱将有更好净化效果,因此新标准GB 31658.5采取了MCX固相萃取净化。
关键词: 5 mL氨甲醇洗脱,氮吹
要点:
Tips:色谱柱或保护柱前加溶剂效应消除器(PN:AN80C037,谱宁科技),对于氟苯尼考和氟苯尼考胺检测限和定量限比较高的药物,5 mL氨甲醇洗脱后,可不经过氮吹,过滤膜后直接进行分析,不但可以满足检测要求,而且可以提高效率和目标物回收率,同时可以避免出现溶剂效应问题。(标准中氮吹的过程,一方面是为了浓缩样品,另一方面是为了转换溶剂,减少分析中出现的溶剂效应问题)。
关键词:MCX固相萃取柱的特点和使用注意事项
要点:
标准中使用的MCX 60 mg/3 mL (PN:AN60A012,纳鸥科技),混合型强阳离子交换反相柱,提供了双重保留模式:强阳离子交换+反相。
MCX小柱对于碱性化合物具有高的选择性,能够选择性保留阳离子化合物或者碱性化合物。
当目标化合物酸化后,呈现出阳离子特征,通过电荷和分子间力的结合,从而保留在MCX小柱上,随后可以通过改变离子强度、PH值破坏分子间作用力,把目标分析物洗脱下来。
所以前面提到的备用液是5%的乙酸,就是为了净化步骤上柱创造一个酸性条件。
氟苯尼考和氟苯尼考胺在酸性环境下表现为阳离子,上柱后就能保留在MCX小柱上。随后是用5%的乙酸淋洗,去除干扰物的同时,需要的分析物仍旧保留在小柱上。
洗脱时,洗脱液是10 %氨甲醇,这时目标分析物就不在表现为阳离子,从而洗脱下来,实现了净化效果。