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北京纳鸥科技有限公司时间:
2022-06-16行业:
食品/饮料/烟草 综合原理
试样中残留的四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物,用Mcllvaine-Na2EDTA缓冲液提取, 亲水亲脂平衡型固相萃取柱净化,液相色谱-串联质谱法测定,外标法定量。
6.1 试料的制备 取适量新鲜或解冻的空白或供试组织,绞碎,并使均质。
关键词:发热、回收率
要点:
在样品制备时,粉碎的时间如果太长,发热严重的话会对回收率有影响(如四环素类的金霉素),具体参照GB/T 30891-2014 中附录B 的要求制样。
8.1 提取 称取试料1 g (精确至±0.01 g),加Mcllvaine-Na2EDTA缓冲液8 mL,涡旋1 min,超声20 min,-2°C 10 000 r/min离心5 min,收集上清液。残渣中加磷酸盐缓冲液8 mL,重复提取一次,合并两次提取液,混匀,备用。
关键词:提取次数2次
要点:
Ø 标准品中用了2次提取,两次提取用的提取液是不一样的。
第1次采用Mcllvaine-Na2EDTA,此缓冲液是提取四环素类兽残的常用试剂,
但有几个在磺胺类药物单纯用Mcllvaine-Na2EDTA提取回收率不理想,第2次提取用了Mcllvaine-Na2EDTA+磷酸盐缓冲液,对于磺胺类药物有较好的回收率。
关键词:低温
要点:
在提取过程中降低离心的温度至-2℃可以更好的限制样品中的脂肪在水溶液表面的分散,有利于样品的提取转移。
5.5 材料 亲水亲脂平衡型固相萃取柱:200 mg/6 mL,或相当者关键词:亲水亲脂平衡型固相萃取柱
要点:
Ø 国标中净化材料的是亲水亲脂平衡型固相萃取柱,也就是我们平时用的HLB小柱 200 mg/6 mL(纳鸥科技,PN:AN60A005),HLB小柱表面同时具有亲水性和疏水性基团,对各类极性、非极性化合物具有较均衡的吸附作用。
其吸附能力和样品容量是 C18 键合硅胶的 3~10 倍,许多在 C18 难以得到保留的强亲水性化合物,在HLB 上仍有较好的回收率。
8.2 净化 固相萃取柱依次用甲醇 5 mL 和水 5 mL 活化,取备用液过柱,依次用水 5 mL 和20%甲醇水溶液 5 mL 淋洗,抽干,用洗脱液 10 mL 洗脱。收集洗脱液,45℃水浴氮气吹干。 加入复溶液 1.0 mL,涡旋 1 min 溶解残余物,14000 r/min 离心 5 min,微孔滤膜过滤,液相色谱-串联质谱测定。
关键点:氮吹
要点:
Ø 建议控制氮吹时间、温度和流速。实验过程氮吹时间非常长,约60分钟,容易造成部分化合物回收率偏低(比如:四环素类、青霉素类)。
Ø 建议氮吹至100 μL 左右,不氮吹干,可以减少在氮吹过程中部分目标化合物的损失。
关键词:溶剂效应
要点:
Ø 复溶时,加入 0.1%甲酸溶液定容至 1 mL,可以有效的改善部分目标化合物的峰型,降低溶剂效应,同时提高部分化合物的回收率。
Ø 此外,在色谱柱前加一个小配件(溶剂效应消除器,PN:AN80C037),可较好解决由于样品溶剂和流动相不匹配而造成的溶剂效应问题,使峰形更好,响应更高。
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