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氨基酸衍生法数据大PK:OPA or 茚三酮,原来选它

德祥科技有限公司 2022-06-15

氨基酸是构建生物机体的众多生物活性大分子之一,是构建细胞、修复组织的基础材料。它被人体用于制造抗体蛋白、血红蛋白、酶和激素以维持和调节新陈代谢,是一切生命之源。

由于氨基酸的重要性,合适可靠的检测方案将成为评估食品、饲料、药物及生理样品中氨基酸指标的重要选择。

HPLC—柱后衍生法,50多年来作为氨基酸领域的重要检测手段,因为其高效的测试准确性和重现性,深受广大用户的信赖。

氨基酸检测在药物、食品、饲料中的主要应用有:

●   通过分析氨基酸组鉴定多肤和蛋白质;

●   原料药和中间体中的杂质和有关物质的测定;

●   药物中单个或总氨基酸的定量, 包括复杂基质中标记物的测定;

●   重组蛋白生产过程的控制;

●   确定氨基酸组成也是保证食品和饲料营养价值的必要条件;

●   用于产品质量及过程监测。

 

衍生方法介绍

Pickering Laboratories根据上述应用的检测对象的不同,将衍生方法分为OPA衍生法和茚三酮衍生法,两种方法都可以与任何氨基酸阳离子交换柱和洗脱液组合使用。其中我们称为Trione ®的专利茚三酮试剂,也广泛应用于氨基酸分析仪中。

 

OPA法与茚三酮法区别见下表:

                                                                          氨基酸衍生法

 


Trione®试剂(专利)分析法

OPA剂分析法

衍生试剂


TlOO-预混试剂 ;自生产日期起计算, 4个月保质期(950 ml/瓶)

 

TlOOC -预混试剂;自生产日期起计算, 4个月保质期(950 mL/瓶)

 

T200 - 2部分试剂,混合后使用,从生产之日起12个月保质期;4组/箱

(900mL/瓶)

OD104-氨基酸分析用OPA稀释液;

 

O120-OPA试剂(5g/瓶)

 

3700-2000 -疏基化合物。(10g/瓶)

 

这三种产品都是用于氨基酸OPA分析法

适用样品


一级和二级氨基酸

一级氨基酸

 

在与OPA反应之前需要检测二级氨基酸氧化步骤。使用氧化步骤时,一级氨基酸的检测灵敏度会有所降低。

检测器

UV/VIS

FLD

仪器灵敏度

10 pmole (在色谱柱上)

2 pmole (在色谱柱上)

色谱柱&洗脱液

适用于任何阳离子交换柱氨基酸分析法

与任何用于氨基酸分析的阳离子交换柱配合使用

配置

单泵Ony×PCXI vector PCX+ 0.5 m L反应器

单泵Ony×PCX/ vector PCX+ 0.15 ml反应器。

 

*需要带有0.5 mL和0.1 mL反应器的双泵OnyxPCX来检测二级氨基酸。 在此模式下, 初级氨基酸的灵敏度会降低。

 

色谱柱的选择

 

                                图1:钠柱氨基酸分析选择

 

 

                             图2:锂柱氨基酸分析选择

 

 

                                    图3:氨基酸标品

 

 

 

                                         图4:豆粕样品

 

 

 

                                  图5:水解单克隆样品

 

 

Pickering产品

 

 

完整解决方案

欧洲药典8.0对于氨基酸的柱后衍生茚三酮法做了详细的要求,药典对于包括化学、 动物、 人或草药来源的活性物质、赋形剂和制剂,顺势疗法制剂,抗生素,制剂和容器等都有所要求。

Pickering Laboratories 将欧洲药典作为测试依据,为客户提供完整的氨基酸分析解决方案。

 

                   Pickering 柱后衍生仪

 

解决方案包括Onyx PCX/Vector PCX 柱后衍生仪器、分析柱、保护柱、缓冲液和Trione ®茚三酮试剂。并且对方法进行了优化, 在符合药典各项体系适宜性要求的同时,提高了分析的灵敏度及分析效率。

 

                               Pickering全套试剂包

 

 

                         图6:依据欧洲药典8.0法测试氨基酸

 

 

 关于Pickering Laboratories

 

美国Pickering Laboratories公司是仅有的专业提供人工测试体液和柱后衍生化学试剂、色谱柱、分析方法等柱后衍生分析整体解决方案的机构,其不断创新及良好的信誉被众多的美国政府机构如EPA、ATF、FDA、AOAC和世界著名的厂商所认可。

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