菲罗门关于氨基酸HPLC分析方法总结&色谱柱选择

氨基酸作为构成多肽和蛋白的基本单元，是非常重要的一类化合物。
随着生物药的逐渐兴起，作为原料的氨基酸的质量分析的需求也越来越大。
大部分氨基酸由于至少同时含有大极性的氨基和羧基，因此整体极性很大，常用的C18柱+反相流动相对其保留很弱，同时部分氨基酸由于紫外吸收很弱，因此让流动相和检测器的选择更有挑战。

本文系统总结广州菲罗门积累经典色谱应用，包括氨基酸衍生化分析、非衍生氨基酸直接分析、保护型氨基酸的手性分析以及非保护型氨基酸直接手性分析四种广受关注的应用。

一、氨基酸衍生化分析
氨基酸衍生的方法比较多，最常用的是AQC衍生和PITC衍生。
虽然过程相对繁琐，但是通过衍生后，一举解决了氨基酸分析的两个难点：
保留和紫外吸收。
通过衍生反应在氨基酸上接上疏水且有紫外吸收的基团，可以实现在C18柱+反相流动相的体系下进行HPLC分析。

AQC衍生法：

 PITC衍生法：

二、非衍生氨基酸直接分析

当选择氨基酸非衍生直接分析时，对于有些疏水性比较好的氨基酸，可以直接用C18类柱子分析，比如：

可以选用带有HILIC作用的色谱柱实现保留，当使用磷酸盐类时，可以在截止波长条件下用UV检测，比较经典的应用是用ACE HILIC-B检测门鸟氨酸：

菲罗门也推出Comix系列智能神柱，可以在以ELSD、 CAD或者MS为检测器的条件下分析氨基酸。

三、保护型氨基酸手性分析

当氨基酸上的氨基和羧基用Boc和/或FMOC等保护起来时，可以用正相或者反相的多糖类手性柱实现非常好的分离，有现成的分析方法，可以极大地减少方法开发的时间。

四、非保护氨基酸直接手性分析

对于非保护的氨基酸，菲罗门推出AAOA分析柱，即通过键合D-青霉胺于十八烷基柱上而成的配体交换型手性柱。该手性柱手性柱可以用于拆分α-型有机酸、α-型非衍生氨基酸及其衍生物、二元胺、二肽、内酰胺和氨基醇等。

到目前为止，我们已经实现了有机酸如D, L-乳酸、D, L-酒石酸的拆分，也实现了氨基酸如D, L-丙氨酸，D, L-天门冬氨酸，D, L-缬氨酸，D, L-脯氨酸：

总结: 本文全面总结了氨基酸类的HPLC分析方法，包括氨基酸衍生化分析、非衍生氨基酸直接分析、保护型氨基酸的手性分析以及非保护型氨基酸直接手性分析。

对于具体氨基酸的分析如有疑问，可以电话020-22826668找到您专属的技术工程师。