我改进了一下酚氯仿法提取得到了猪粪便的DNA,吸光度比值在1.8左右,浓度也达到几百,这些条件已经满足了PCR的要求,但是一直就是扩增不出东西(引物应该没问题)!我就觉得应该是粪便中YZPCR的成分没有去除干净,进行了YZ反应验证,证实确实是YZ物的作... 我改进了一下酚氯仿法提取得到了猪粪便的DNA,吸光度比值在1.8左右,浓度也达到几百,这些条件已经满足了PCR的要求,但是一直就是扩增不出东西(引物应该没问题)!我就觉得应该是粪便中YZPCR的成分没有去除干净,进行了YZ反应验证,证实确实是YZ物的作用,所以请问大家粪便中有哪些YZPCR的成分????怎样才能完全去除粪便中YZPCR的成分???
一、直接基因组上胶跑,确定有基因组带
二、充分稀释基因组模板,其中的YZ成分,比如盐类的作用就可以被淡化至可忽略。一般 10ul PCR体系有个6-10ng DNA模板就可以P得很好(当然Z好用质量好效率高的Taq酶)。可以做个梯度稀释。