高:
原理:
1.析溶解NaC1溶液DNA
2.用冷酒精提取含杂质较少DNA
3.DNA沸水浴二苯胺染蓝色
步骤:
1.提取细胞核物质:顺针向搅拌稍快稍重 5 min
2.溶解DNA:
3.析含DNA黏稠物:蒸馏水300mL逆针向搅拌缓慢
4.滤:取黏稠物
5.再溶解:顺针向搅拌较慢3 min
6.滤:取滤液
7.提取含杂质较少DNA逆针向搅拌稍慢5 min
8.DNA鉴定:沸水浴5min
DNA提取三基本步骤每步骤具体根据品种类、影响提取物质及续步骤同区别
利用研磨或者超声破碎细胞并通加入污剂除掉膜脂
加入蛋白酶醋酸盐沉淀或者酚/氯仿抽提除掉细胞内蛋白与DNA结合组蛋白
DNA冷乙醇或异丙醇沉淀DNA醇溶黏起步能除掉盐
另外目前利用吸附柱提取DNA商业化试剂盒
2.细胞破碎
细菌坚硬细胞壁首先要破碎经胞三种;①机械:超声波处理、研磨、匀浆;②化试剂:用SDS处理细胞;③酶解:加入溶菌酶或蜗牛酶都使细胞壁破碎
3.DNA提取几种
(1).浓盐
A. 利用RNADNA电解溶液溶解度同二者离用用1M 氯 纳提取化钠抽提,DNP粘液与含少量辛醇 氯仿起摇荡,使乳化,再离除蛋白质,蛋白质凝胶停留水相及氯仿相间DNA位于层水相,用2倍体积95%乙醇DNA 钠盐沉淀.
B. 用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除RNP,再1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇除蛋白.
两种比较,种使核酸降解能少些.
C.稀盐酸溶液提取DNA ,加入适量污剂,SDS助于蛋白质与DNA 离提取程YZ组织DNaseDNA 降解作用,氯化钠溶液加入柠檬酸钠作金属离烙合剂.通用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA. (2).阴离污剂; 用SDS或二甲苯酸钠等污剂使蛋白质变性,直接物材料提取DNA .由于细胞DNA与蛋白质间借静电引力或配位键结合,阴离污剂能够破坏种价键,所用阴离污剂提取DNA
(3).苯酚抽提:苯酚作蛋白变性剂,同YZDNase降解作用.用苯酚处理匀浆液,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白表面含极性基团与苯酚相似相溶蛋白溶于酚相DNA溶于水相离层取水层重复操作再合并含DNA 水相利用核酸溶于醇性质用乙醇沉淀DNA DNA十粘稠物质用玻璃漫漫绕团取特点使提取DNA保持状态
(4).水抽提:利用核酸溶解于水性质,组织细胞破碎,用低盐溶液除RNA沉淀溶于水使DNA充溶解于水,离收集清液.清加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌搅.别用66% 80%95%乙醇及丙铜洗涤,空气干燥,既DNA品.提取DNA蛋白质含量较高,故般用.除蛋白加改良,提取程加入SDS.