怎么用实验鉴定中药抗大肠杆菌

1 材料与方法
　　1.1 材料
　　中药：侧柏叶、大蓟、艾叶、石菖蒲、夏枯草、黄芩购自广西一心药业百色连锁店。菌种：耐药性大肠杆菌由右江民族医学院微生物学教研室分离、鉴定、保存。大肠杆菌经青霉素和红霉素的标准药敏纸片（购自杭州天和生物有限公司）测定为耐药。试剂：M-H培养基、NS购自杭州天和生物有限公司。其他材料：滤纸、培养皿、棉签等购自杭州天和生物有限公司。
　　1.2 方法
　　1.2.1 煮沸法提取药液［2，3］
　　6味中草药各50g分别加水过药面，文火煎煮，煎煮时间第1次为1.5h，第2次为40min，第3次为30min。将3次药液合并后浓缩为100ml（相当于0.5g/ml生药），再取第1次浓缩液10ml，将其浓缩为5ml的2次浓缩液(相当于1.0g/ml生药）。将2次浓缩液备用。
　　1.2.2 自制药敏纸片
　　制作直径6mm的滤纸纸片，高压灭菌后烘干，然后把滤纸片浸泡于浓缩液中过夜，60℃烘干箱烘干，无菌保存备用。
　　1.2.3 K-B法药敏试验［4］
　　①按每1000ml蒸馏水称取Muller-hinton Agar 38g配备M-H琼脂，按每个平皿(直径9mm)25ml进行分装。②将孵育16～24h的菌种分别接种于生理盐水试管中，校正浓度至0.5麦氏标准(相当于1.0×108CFU/ml)。③用无菌棉签蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余菌液后在M-H琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60°，Z后沿平板内缘涂抹1周。④平板在室温下干燥3～5min后用无菌镊子将药物纸片紧贴于琼脂表面，置35℃孵育16～18h，记录YJ圈的直径。⑤药敏实验重复3次，以 3次平均值为该味药的YJ直径。
　　1.2.4 观察结果
　　观察6种中药提取物在体外对耐药性大肠杆菌的YJ效果。
　　2 结果
　　
　　K-B法测定不同浓度6味中药水煮物对耐药性大肠杆菌的YJ情况：夏枯草、黄芩两味中药在浓度0.5g/ml时有YJ作用，其他4味中药无YJ作用；浓度在1.0g/ml时6味中药均有不同程度的YJ作用，但夏枯草、黄芩两味中药YJ作用特别明显，见表1。表1 K-B法测定不同浓度6味中药水提物对耐药性大肠杆菌的YJ直径(略)