首先,你的质粒必须是穿梭质粒,否则不可能转的。
如果是穿梭质粒的话,提取出来直接转化感受态的农杆菌就好。
步骤:
农杆菌感受态细胞的制备
1.挑取少许农杆菌,接种于5ml LB液体培养基 (含50mg/L STR)中,28℃、200r/mim培养过夜。
2.取2ml培养物于LB液体培养基 (含50mg/L STR) 中继续培养,直至OD800 为0.5左右。
3.将培养物置冰浴中30min,4℃、5000r/min、离心5min,弃去上清液。
4.用10ml冷的0.1mol/L NaCl悬浮菌液。
5.4℃、5000r/min,离心5min,弃去上清液。
6.用1ml冷的CaCl2 (20mmol/L)悬浮,分装成50μl/管,液氮中冷冻后至-80℃保存
不是穿梭载体。