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75%乙醇,在植物基因组dna的提取试验中什么作用

oiadsfjdfas 2017-11-02
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zky914
同物(植物、物、微物)基组DNA提取所同; 同种类或同种类同组织其细胞结构及所含同离差
异提取某种特殊组织DNA必须参照文献经验建立相应提取, 获用DNA尤其组织糖酶类物质随酶切、PCR反应等较强YZ作用,用富含类物质材料提取基组DNA, 应考虑除糖酚类物质
本实验水稻幼苗材料,习基组DNA提取般
DNA
、材料
水稻幼苗
二、设备
移液器冷冻高速离机台式高速离机水浴锅陶瓷研钵50ml离 管(盖)及5ml1.5ml离管弯钩状玻棒
三、试剂
1、提取缓冲液?:100mmol/L Tris?Cl, pH8.0, 20mmol/L EDTA, 500mmol/L
NaCl, 1.5% SDS
2、提取缓冲液?:18.6g葡萄糖6.9g二乙基二硫代碳酸钠6.0gPVP240ul巯基乙醇加水至300ml
3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇
4、 RnaseA母液:配见第章
5、其试剂:液氮、异丙醇、TE缓冲液水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc
四、操作步骤:
()水稻幼苗或其禾木科植物基组DNA提取
1. 50ml离管加入20ml提取缓冲液?, 60?水浴预热
2. 水稻幼苗或叶5-10g, 剪碎, 研钵加液氮磨粉状立即倒入预热
离管, 剧烈摇混匀, 60?水浴保温30-60钟(间,DNA产量高), 摇
3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液, 颠倒混匀(需带手套, 防止损伤皮肤)室温静置5-10钟, 使水相机相层(必要重新混匀)
4. 室温5000rpm离5钟
5. 仔细移取清液至另50ml离管,加入1倍体积异丙醇,混匀,室温放置片刻即现絮状DNA沉淀
6. 1.5ml eppendorf加入1ml TE用钩状玻璃棒捞DNA絮团,干净吸水纸吸干,转入含TE离管,DNA快溶解于TE
7. DNA形絮状沉淀,则用5000rpm离5钟, 再沉淀移入TE管收集沉淀,往往难溶解于TE,60?水浴放置15钟帮助溶解
8. DNA溶液3000rpm离5钟, 清液倒入干净5ml离管
9. 加入5μl RNaseA(10μg/μl), 37? 10钟, 除RNA(RNADNA操作、析般影响省略该步骤)
10. 加入1/10体积3mol/L NaAc及2×体积冰乙醇,混匀,-20?放置20钟左右,DNA形絮状沉淀
2 0 2017-11-03 0条评论 回复
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