我在做植物基因组DNA提取实验时出了问题,但是没想出原因。加入酚氯仿离心之后,再加氯仿离心,此时发现上清呈综色,老师说颜色太深,不正常,还说可能是因为酚氯仿离心后取上清时不小... 我在做植物基因组DNA提取实验时出了问题,但是没想出原因。
加入酚氯仿离心之后,再加氯仿离心,此时发现上清呈综色,老师说颜色太深,不正常,还说可能是因为酚氯仿离心后取上清时不小心把蛋白质吸出来了,可我不明白为什么有蛋白质颜色就深了,而且我们Z后得到的DNA沉淀物是黑绿色的(搞不清是黑色还是绿色),这是因为什么呢?而且我们在往离心管里加酚的时候没有把枪头没入液体中,会不会当时氧化了才会呈棕色,到底是因为什么可不可以帮我分析分析,尤其是老师说的话是因为什么?
不知道你提取的是什么植物,不过用酚氯仿方法提基因组DNA有颜色是很正常的事。
首先,肯定不是蛋白质被吸上来了,你不放心可以少吸一点上清。由于某些植物中富含多酚多糖类物质,当从细胞中分离出来很容易氧化而转变成溶于水相的有颜色的成分。
还有你提到加酚的时候没有把枪头没入液体中,这也无关紧要,酚被氧化后的产物也只存在有机相中,所以不用担心。
你老师说颜色太深了,估计是你样本起始量放多了,你可以试着少加一点样本,裂解液翻倍加,放大体系通常可以稀释杂质的含量。
至于Z后DNA沉淀溶解后有颜色,如果条件允许的话,过个柱子纯化下即可。