如何使用离心机提取植物基因组DNA

就那植物来说吧!原理是一致的.方法不同. 1植物组织提取基因组DNA 一、材料 幼嫩叶子. 二、设备 移液器，冷冻高速离心机，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，50ml离心管（有盖）及5ml和1.5ml离心管，弯成钩状的小玻棒. 三、试剂 1、提取缓冲液Ⅰ：100mmol/L Tris·Cl，pH8.0，20mmol/L EDTA，500mmol/L NaCl，1.5% SDS. 2、提取缓冲液Ⅱ：18.6g葡萄糖，6.9g二乙基二硫代碳酸钠，6.0gPVP，240ul巯基乙醇，加水至300ml. 3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇 4、 RnaseA母液 5、其它试剂：液氮、异丙醇、TE缓冲液，无水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc. 四、操作步骤： 1.在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液Ⅰ，60℃水浴预热. 2.幼苗或叶子5-10g，剪碎，在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中，剧烈摇动混匀，60℃水浴保温30-60分钟(时间长，DNA产量高)，不时摇动. 3.加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液，颠倒混匀(需带手套，防止损伤皮肤)，室温下静置5-10分钟，使水相和有机相分层(必要时可重新混匀). 4.室温下5000rpm离心5分钟. 5.仔细移取上清液至另一50ml离心管，加入1倍体积异丙醇，混匀，室温放置片刻即出现絮状DNA沉淀. 6.在1.5ml eppendorf中加入1ml TE.用钩状玻璃棒捞出DNA絮团，在干净吸水纸上吸干，转入含TE的离心管中，DNA很快溶解于TE. 7.如DNA不形成絮状沉淀，则可用5000rpm离心5分钟，再将沉淀移入TE管中.这样收集的沉淀，往往难溶解于TE，可在60℃水浴放置15分钟以上，以帮助溶解. 8.将DNA溶液3000rpm离心5分钟，上清液倒入干净的5ml离心管. 9.加入5μl RNaseA(10μg/μl)，37℃ 10分钟，除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响，可省略该步骤）. 10.加入1/10体积的3mol/L NaAc及2×体积的冰乙醇，混匀，-20℃放置20分钟左右，DNA形成絮状沉淀. 11.用玻棒捞出DNA沉淀，70%乙醇漂洗，再在干净吸水纸上吸干. 12.将DNA重溶解于1ml TE，-20贮存. 13.取2μl DNA样品在0.7% Agarose胶上电泳，检测DNA的分子大小.同时取15μl稀释20倍，测定OD260/OD280，检测DNA含量及质量. [注意] 5g样品可保证获得500μg DNA，足供RFLP、PCR等分析之用.