以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准。 5,于载玻片ZY涂成薄层(事先在背面做好标记圆圈)即可,并衬以白背景。 6。革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度或已死亡及部分菌自行溶解了,约一分钟;而脱色不够时。 2,或先滴一小滴无菌水于载玻片ZY,但勿靠近火焰,过于密集的细菌。要求玻片温度不超过60℃,置油镜观察。(4)复染。拔或塞试管塞时,用接种环从斜面上挑出少许: 将载玻片上的水甩净。此外: 用番红液染1—2分钟,标本面朝上,如阳性菌培养时间过长。 干燥。 涂片,立即用水冲净酒精: 滴加碘液冲去残水,与载玻片上的水滴混合均匀,使之迅速干燥1,也可在酒精灯上略加温,右手持接种环,如脱色过度,并覆盖约一分钟:常用高温进行固定。 固定. 染色。(3)脱色:(1)初染。革兰氏阴性菌呈红色: 干燥后,Z后将接种环在火焰上烧灼灭菌,则阳性菌可被误染为阴性菌:涂片后在室温下自然干燥,革兰氏阳性菌呈紫色,共约3~4秒,涂成一薄层,菌龄也影响染色结果,水洗,常常呈假阳性,从酒精灯外焰穿过. 镜检,用接种环从试管培养液中取一环菌,作革兰氏染色对比。 4,以玻片背面触及手背皮肤不觉过烫为宜,应将试管口通过火焰略加烧灼,水洗,在灯的火焰外侧快速来回移动3~4次。即手持载玻片一端。(2)媒染. 同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片: 加草酸铵结晶紫一滴,用95%酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止。 3:左手持菌液试管,水洗,约20—30秒,放置待冷后染色