如何分辨“真“、”假”全自动细胞计数仪？

上一篇《给大家推荐一种细胞计数仪性能检测的方法》中，我们发现全自动细胞计数仪检测细胞样品的重复性和梯度稀释的结果准确性上，都比半自动插板式细胞计数仪更有优势。

那么大家可能会问：

“导致这样的性能差异原因是什么呢？另外，目前市场上都自诩所卖的细胞计数仪是全自动的，那我们如何区分哪个是‘真’，哪个又是‘假’的呢？”

要回答这2个问题，首先我们需要对图像法细胞计数的过程做下回顾。下面是图像法台盼蓝染色细胞计数和活率分析的基本流程。

细胞吹打混悬后定量吸取样品

等体积吸取台盼蓝吹打染色

染色好的细胞加到血球计数板或细胞计数板上

显微镜下手动或自动统计死活细胞数，然后计算活细胞密度和活率

清洗血球计数板或更换新的细胞计数板

传统显微镜下手工细胞计数，以上5步操作都要操作人员来完成。这种方法因为人为操作带来的误差，导致结果差异有时会很大，甚至超出通常可以接受的±10%偏差范围。并且随着样品数越多，操作人员会逐渐造成眼疲劳，无法继续进行有效并准确地计数。

手工显微镜法细胞计数的照片和计算方法

插板式半自动细胞计数仪的出现，省去了操作人员肉眼统计和分析死活细胞数的步骤，仪器操作只需要将样品混匀、定量染色和上样分析（有时要手动对焦），测试结束后更换新的细胞计数板做下一个样品。

用于半自动细胞计数仪的各类细胞计数板移液枪加样的照片

半自动细胞计数仪的缺点在于：由于每块细胞计数板的检测样品数量有限，所以检测新的样品需要更换新的板子。但板子批次间存在差异，样品和台盼蓝体积需要手动定量，取样量少代表性差（从30-50mL样品中一般就只吸取20uL样品），染色后的细胞样品通过移液枪加样有时还产生气泡而报废，用后废弃的细胞计数板会产生二次污染物，这些目前都还没有好的处理方法。

那有没可能细胞的混匀和染色，以及细胞的计数和分析过程全部实现自动化，同时不用手动更换新的细胞计数板而自动做下一个样品呢？答案是使用全自动细胞计数和活率分析仪。

全自动细胞计数仪相比半自动插板式细胞计数仪的优势点小结：

全自动吹打混悬和台盼蓝染色

全自动细胞计数仪的一个显著特点是：能够自动完成细胞的吹打混悬和台盼蓝染色。

要实现全自动吸取等体积的细胞样品和台盼蓝染料，首先需要由仪器内部的步进马达精确地完成加样体积的控制。其次，因为可以全自动吸取样品，所以全自动细胞计数仪会有1个转盘或孔板放置其他待测样品。对于排在后面的细胞若发生沉降，就需要在测试前对样品进行吹打混悬，以防止细胞沉降导致测试结果出现偏差。而这2步操作，半自动细胞计数仪都只能通过手动来完成，从而引入人为操作误差。

同时，Vi-CELL BLU全自动细胞计数仪单个样品检测的取样体积200±20uL，加样体积不需要很准确，仪器自动会完成定量取样。相比半自动细胞计数仪只有10-50uL的取样体积，而且由手动操作完成。取样体积大代表性更好，测试结果更容易接近真实值。

动态百图分析

Vi-CELL BLU全自动细胞计数仪测试细胞样品，单个样品拍摄的照片达到了100张，分析的细胞数量更多，1x10e6个/mL的细胞悬液拍摄100张照片的细胞数差不多2600个。单个样品检测拍摄的细胞数越多，检测结果的系统误差越小，测试结果的重复性和准确性也相应更高。

其中1张照片（上左图）和100张照片的分析柱状图

高通量和不间断检测

全自动细胞计数仪的另一个特点是高通量和不间断检测，即待测样品可以先放到转盘或96孔板上，根据软件中设置好的分析条件，仪器会自动按要求完成细胞的计数和活率分析。

Vi-CELL BLU全自动细胞计数和活率分析仪一次最多可以放21个样品（使用24位转盘）或96个样品（使用96孔板）进行分析测试。若使用24位转盘，在检测过程中还可以实现不间断上样测试，即样品测试过程中，还可以放入新的待测样品。

综上所述，全自动细胞计数仪在细胞样品混悬和染色方面避免了人为操作带来的误差，同时百图分析拍摄的细胞数多，结果代表性更好。所以，在细胞计数方面重复性和准确性上相比半自动插板式细胞计数仪更有优势。

同时，全自动细胞计数仪的高通量和不间断检测功能，又满足实验室样品量大，不同老师共用该仪器的检测需求。并且每个样品测试结束后，仪器会自动进行管路清洗，仪器本身还带有自动过夜清洗功能，使得仪器一直处于待机状态。所以，在操作便捷性上，全自动细胞计数仪也胜过半自动插板式细胞计数仪。

以上这些特点可以用于区分我们使用的细胞计数仪是“全自动”还是“半自动”，同时也是为何全自动细胞计数仪性能上要优于半自动的地方。希望大家可以通过这些方法来分辨“真”、“假”全自动细胞计数仪。