不知道你说的是以下哪三种呢?感觉都还可以
Bicinchoninic acid (BCA )法是在世界上常用的蛋白浓度检验方法之一BCA法基础上改进而成。其原理与Lowery法蛋白定量相似,即在碱性环境下蛋白质与Cu 2+ 络合并将Cu 2+ 还原成Cu + 。两分子BCA与一个Cu + 螯合形成稳定的紫蓝色复合物,在562 nm处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比,据此可测定蛋白质浓度。与Lowery法相比,BCA蛋白测定方法灵敏度高,操作简单,试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳,在50-200μg/ml浓度范围内有良好的线性关系,并且受干扰物质影响小。与Bradford法相比,BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响。
Lowry法包括两步反应:diyi步是在碱性条件下,蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物;第二步是此络合物将Folin试剂还原,产生深蓝色,颜色深浅与蛋白质含量成正比。定量范围为5~100μg/ml蛋白质。Folin试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起,因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物均有干扰作用。此外,不同蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不同而使显色强度稍有不同。
Bradford法是Z常用的蛋白质快速定量方法。Coomassie brilliant blue G-250与蛋白质结合使染料的Z大吸收峰由465 nm变为595 nm,溶液的颜色由棕色变为兰色,595nm波长下吸光度值与蛋白含量成正比。灵敏度比Lowry法高4倍,与BCA法相当。反应迅速,2分钟即可达到平衡并在1小时内保持稳定。操作简便,只需要一种反应试剂。干扰物质少,钠钾镁离子、Tris、葡萄糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、硫酸氨、EDTA等均不干扰测定。提供5×染料浓缩液可进行200-400T标准2 ml比色杯检测,或2500Tmicroplate检测。