如何制备大肠杆菌感受态细胞

（1）挑取大肠杆菌单菌落，接种于5 ml无抗生素的LB液体培养基中，37℃下振荡培养13h，至对数生长后期。将该菌悬液以1:50 的比例接种于100 ml LB 液体培养基中，37℃振荡培养2-3h至OD600＝0.5。
（2）在无菌条件下将培养液转入离心管中，冰上放置10 min，使培养物冷却至0℃，然后4℃，4000rpm离心10min；
（3）弃去上清，倒置1 min，以便将培养液流尽；
（4）用冰预冷的0.1 mol/L的CaCl2溶液10 ml轻轻悬浮细胞，充分混匀，冰上放置30 min后，4℃下4000rpm离心10min；
（5）弃去上清，并倒置1 min，以便Z后的痕量培养液流尽；
（6）加入4 ml预冷含15%甘油的0.1 mol/L的CaCl2溶液，轻轻悬浮细胞，冰上放置几分钟，即成感受态细胞悬液；
（7）感受态细胞100 μL分装，贮存于-70 ℃保存备用。