PCR琼脂糖凝胶电泳后发现核酸向负极方向反着跑到胶的头部了，怎么回事？
王玲玲787878
2011-02-26
我研究的方向是分子生物学，这几天一直在做细菌核酸提取及16SrDNA通用片段常规PCR检测，提取核酸方法是用水煮法，可每次PCR完跑电泳后，发现结果都是核酸向负极方向反着跑了，和Marker方向相反，跑到槽的上方，查了好多资料就是没说到这方面的原因，然后换了用... 我研究的方向是分子生物学，这几天一直在做细菌核酸提取及16SrDNA通用片段常规PCR检测，提取核酸方法是用水煮法，可每次PCR完跑电泳后，发现结果都是核酸向负极方向反着跑了，和Marker方向相反，跑到槽的上方，查了好多资料就是没说到这方面的原因，然后换了用QIAGEN的试剂盒提取，还是出现了一样的结果，我做的是革兰氏阴性菌的，理论上应该很简单，可就是见鬼了，望大家能帮忙解决，毕业实验时间迫在眉睫了...
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这里有个论坛，讨论这事
http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/18605.html
你看看有没有他们提到的任何一种情况？
还有，你做的是PCR，可以看到有未结合的引物在下方，而你在上方的那些条带看起来并不是PCR产物（太长）。PCR产物看起来应该和Marker类似（形状）。建议你换个PCR试剂盒看看。
这个不是跑反了吧，好像是没有跑出来啊，你看下面很小的地方还有东西呢，你是提的基因组吗?基因组很大，没跑出进样孔很正常啊
marker跑的没问题，说明这不是电泳的事儿，你PCR有阳性对照吗？阳性对照检查你PCR体系是否正常，16S的引物是否新合成的，用其他菌PCR试试，以确定你提取的基因组是否有问题，向上跑的一般是杂质能结合EB并且带正点荷。
我也觉得那个亮亮的不是DNA，感觉PCR就没P出来，你提完基因组跑没跑过？再有你提的时候菌是不是比较老啊，杂质多的话可能也会影响PCR，还有看看引物单看他们有没有合错~
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