你的胶是考染的吗?
首先你得先知道一点蛋白质的基本理论知识(不会不知道吧?难道你是学医的?),或者说蛋白质(包括其他分子,如DNA、RNA等)电泳的原理(或者说是分离原理)。只说蛋白质:蛋白质在正常情况下,一般带有负电荷,因由不同的蛋白分子因为性质(空间结构以及基团性质)不同而带电量不同,这样结合蛋白质分子本身的不同质量,会在电场下(即电泳中)产生不同的移动速度,进而将不同的蛋白分离开。又为了消除蛋白质分子间性质的差别,创造一个单一因素的电泳分离条件,所以在进行蛋白质电泳之前,都会对蛋白质进行变性处理(非变性胶等不在此列),使蛋白质肽链打开:SDS是阴离子去污剂,作为变性剂和助溶试剂,它能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白分子的二、三级结构。而强还原剂如巯基乙醇,二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后,分子被解聚成多肽链,解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS胶束,所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量,这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。
如此,蛋白质(准确的说应该是变形后的蛋白质或者是蛋白- SDS胶束)便会在电场中根据不同的带电量- 亦即分子量而分成不同的条带。每一条带代表着不同分子量大小的蛋白质组合(一组蛋白质)。
上面只说的是SDS-PAGE胶蛋白质电泳。当然,在电泳后,需要进行染色,你才能看到蛋白条带(Marker除外,因为它是带有耦合染料的蛋白质分子或片段)。