请问各位大侠，我的蛋白质酶解液（原液）尚且可以通过SDS-page电泳跑出条带，可为什么酶解液除盐再通过柱层析（用0.02N pH7.0的NaH2PO4和Na2HPO4缓冲液洗脱过柱）纯化后却跑不出电泳条带了呢？快毕业了，请各位救我!!!谢谢大家啊！:~):~):~)大家能说说样品中会... 请问各位大侠，我的蛋白质酶解液（原液）尚且可以通过SDS-page电泳跑出条带，可为什么酶解液除盐再通过柱层析（用0.02N pH7.0的NaH2PO4和Na2HPO4缓冲液洗脱过柱）纯化后却跑不出电泳条带了呢？快毕业了，请各位救我!!!谢谢大家啊！:~):~):~)大家能说说样品中会有哪些因素影响SDS_PAGE的吗？谢谢大家了！痛哭流涕。。，
我做过G-25柱，效果不错。
我所在小组也用过磷酸缓冲液做纯化，也用透析除盐，同样也遇到过和你一样的问题，洗脱峰明明有光吸收，可是就是跑胶没带，现在这个问题已经解决，呵呵，很有可能你跟我们的问题一样。
问题关键是：蛋白浓度！
我们的蛋白本身易降解，且纯化率低，蛋白浓度很低，再加上透析、除盐等复杂步骤，脆弱的蛋白又被大量稀释，那么增加初始蛋白来源不就可以了么？将原始菌液扩大好几倍，Z后将蛋白进一步浓缩再跑胶，于是看到了漂亮的目的蛋白带~~~
另：我不认为你的蛋白样品成分会影响电泳（除非样品含盐量过高，蛋白会跑不动）
以上叙述不是全部，蛋白纯化是比较复杂的问题，想要做好，是需要摸很多条件的。以上仅供参考。
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kouchem7280 
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