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SDS-PAGE蛋白电泳配胶不凝固

lili6898505 2009-03-19
做SDS-PAGE蛋白电泳配胶 12%的分离胶30分钟左右能凝固 但配5%的浓缩胶分离胶时却不能凝固 请高人指导下 急呀 !!!!!
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樱风旋律
1,多加过硫酸铵试试
2,多加点TEMED,可加速凝固
3,配好胶后放在温箱里凝的快些,环境温度低会影响凝的速度。我在冬天会灌好胶后放在培养箱里,一般很快就凝了,可以提GX率,一天Z多可以跑5次。

Z后,经常出现浓缩胶凝但不成形,非常粘,这是因为C液(浓缩胶缓冲液)的pH值不对,重新配制C液

做了四年蛋白电泳实验,不凝是是Z初发生的问题,基本按以上思路解决的,以后再没遇见过,但也不排除我能力范围之外的没想到的因素
10 0 2017-11-27 0条评论 回复
紫依飘苓
分离胶30分钟左右凝固有点慢,可能AP配制时间过长。多加点试试。
5 0 2009-03-20 0条评论 回复
萌神库拉
这么专业的问题在这里问,你肯定是得不到答案的,查专业书靠得住些。
6 0 2009-03-20 0条评论 回复
7832279
多加TEMED是正确的
加标准值的两倍
20 0 2009-03-21 0条评论 回复
爱陷入你的温柔
过硫酸氨Z好现配,4度保存Z多7天
17 0 2009-04-03 0条评论 回复
爱—清零
我分析原因是过硫酸胺失效,过硫酸氨Z好是先用现配,如果怕麻烦而且跑胶的频率很高的话,那么用完之后ap要放在4℃保存,一周之后必须新配。另外可以适当的增加temed的量,从5μl提高到8μl并无大碍。
如你所说,是不是就是ap失效呢,还有,我强烈建议你复查一边浓缩胶,分离胶各各buffer的组分是否配制有误,特别是pH,另外,现在气温上升,原来冬天配制的溶液的pH和现在可能会相差很多,建议复查,如果pH不对,重新配过。一般情况下,对于pH有要求的溶液,季节更换的时候,基本要重新配过的。原来以贮存液形式存在的溶液,在稀释用作工作液的时候,也要特别注意pH
13 0 2009-03-22 0条评论 回复
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