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鸭瘟酶联免疫分析(ELISA)试剂盒定性使用说明书

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鸭瘟酶联免疫分析(ELISA)试剂盒定性使用说明书

本试剂仅供研究使用

目的:本试剂盒用于检测鸭血清,血浆及相关液体样本中鸭瘟水平。

操作步骤:

编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml后备用洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。温育:操作同3。洗涤:操作同5。显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

结果判定:

试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00;阴性对照平均值≤0.10

临界值(CUTOFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15

阴性判定:样品OD值<临界值(CUTOFF)者为鸭瘟阴性

阳性判定:样品OD值≥临界值(CUTOFF)者为鸭瘟阳性

注意事项

1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。

2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5.底物请避光保存。

6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为630nm

7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸,使用时必须注意安全。


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2004-12-08
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