肺炎衣原体ELISA试剂盒定性说明书

本试剂仅供研究使用.目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中肺炎衣原体水平。注意事项:1.操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。3.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。4.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。>5.底物请避光保存。6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm。7.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。实验原理：本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)测定标本中人肺炎衣原体。用纯化的人肺炎衣原体抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中肺炎衣原体相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的肺炎衣原体抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，与CUTOFF值相比较，从而判定标本中人肺炎衣原体的存在与否。

试剂盒组成：

样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤：1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  4.配液：将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。结果判定：试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10,临界值(CUT OFF)计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15,阴性判定：样品OD值< 临界值(CUT OFF)者为人肺炎衣原体阴性,阳性判定：样品OD值≥ 临界值(CUT OFF)者为人肺炎衣原体阳性.保存条件及有效期:1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月