仪器资讯
主要用途
动物细胞/组织线粒体DNA萃取试剂是一种旨在通过物理或化学破膜及离心处理方法，从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体细胞器，然后进一步生物酶处理以获得高质量的线粒体DNA的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种动物软组织（肝或脑组织）和培养细胞的线粒体核酸成分的分离。用于后续的杂交、克隆、酶切、PCR分析等。产品即到即用，操作简易，性能稳定，无核酶污染，萃取纯度和产量皆高。
技术背景
线粒体细胞器的研究是现代细胞生物学的Z重要的课题之一。线粒体成为生物衰老、古生物、细胞凋亡、肿瘤、HIV、老年痴呆症、糖尿病、肌肉疾病等研究的主要对象。线粒体DNA的分离和定量以及突变分析是研究中必不可少的。
用户自备
HANK平衡盐缓冲溶液（12028）或PBS缓冲溶液（12033）：用于清理细胞样品
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（12024）：用于细胞脱离
完全细胞培养液（12052）：用于细胞处理所需的培养基
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
50毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
涡旋震荡仪：用于混匀
4℃（微型）台式离心机：用于样品操作
4℃超速离心机：用于样品操作
DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞
58℃恒温水槽：用于孵育反应物
注意事项
1．本产品为10次（1克动物组织或5X107细胞）操作
2．操作时，须戴手套
3．所有操作均须无菌状态下进行，避免污染母液，尤其是裂解液（ReagentB）和保存液（ReagentE）
4．线粒体操作均须在4℃或以下状态进行
5．建议使用足够的样品量
6．建议严格控制操作时间
7．通常匀化次数为20至40下（或细胞颗粒群/组织块状消失为止）达到80％的细胞裂解为理想状态，但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升匀浆物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加匀化次数
8．通常孵育5分钟（不宜超过5分钟）达到80％的细胞裂解为理想状态，但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升裂解物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加孵育时间和涡旋震荡次数
9．对于难以裂解的细胞或组织，采用物理匀浆法是优先推荐的技术处理
10．试剂中的溶液使用前摇匀；酶解液（ReagentH）需放进37℃温育少许；为避免反复冻融，建议适量分装
11．通常1克动物组织或5X107细胞的线粒体含量为50微克线粒体蛋白
12．可以通过增加线粒体溶解时间（30分钟）和酶解时间（直至16小时），获得大量的DNA产量
13．通常1克动物组织或5X107细胞中提取的线粒体DNA达10至20微克
14．本产品所获得的线粒体DNA纯度和产量Z为理想，确保无核DNA和外源性DNA污染
15．本公司提供系列线粒体技术产品
质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定无核酶污染
3．本产品经鉴定萃取产量和纯化程度高
4．本产品经鉴定无基因组DNA污染
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