gibco胎牛血清美国26400-044北京
全部血清:收集的血液均在冷藏条件下处理。血清和凝块分离后立即将血清合并并冷冻。只有符合我们的检测标准的血清才被接受作进一步处理。
热灭HX清:热灭活是在56℃水浴中严格控温30分钟。
超低IgG胎牛血清:我们持有从血清中通过层析方法去除γ球蛋白的ZL。经过这种程序处理的血清只有极低的IgG浓度(小于5g/ml)但保持了血清的全部生物学活性。
透析血清:用12,000~14,000截留分子量的透析膜对0.15M的NaCl进行透析直到葡萄糖水平低于5mg/dl(用葡萄糖氧化酶/过氧化物酶方法检测)。为防止沉淀和血清中多肽的灭活,不进行过度的透析,因此一些小分子量的可透析成分如氨基酸不一定完全去除。
γ射线照射血清:可按客户要求对血清进行γ射线照射。通过γ射线照射以灭活各种动物血清中的病毒和支原体的方法已经得到证实。研究证实照射剂量在30-45kGy为宜。这一数据符合Zxin的欧洲和美国FDA的标准,证实血清被照射后物理化学特性和细胞培养表现没有改变。
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[注意事项]gibco26400-044美国胎牛血清
1.血清解冻:将血清从冰冻区中取出后(切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀),先置于2~8℃区域中使之融化,然后在室温下使之全融。使用前再预温到将使用的温度(如37℃),但必须注意的是,解冻过程中应轻轻地摇晃均匀。
血清在解冻过程中可能会出现少量絮状或片状析出物,主要是血清中脂蛋白的变性或是纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)析出,但这些析出物,并不影响血清本身的质量。若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。
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由于采用严格的生产流程而使得GIBCO血清的批间差降至Zdi。但由于动物来源不同而导致的生物化学性质的差异也是不可避免的。GIBCO提供两种免费的方式以减小这种微小差异给您的研究带来的影响。
血清匹配程序:这一程序可以保证您所收到的血清具有您所要求的特性和培养表现。您只需简单地告诉我们您的要求,我们将向您提供与您的需求相匹配的某一批号血清。我们同样可以提供与您已经使用过的GIBCO血清相匹配的某一批号血清。使用这一程序,您将无须再做费时费力的批次检验工作,因为我们提供的血清与您的需求相匹配。
保留血清检验程序:对于一些极端敏感的应用,使用我们的保留血清检验程序可帮助您获得一个样品以检测是否适用于您的培养。在您对样品进行检测的同时,我们保留您所指定数量的同一批号产品。通常血清可保留4个星期,如您需更长的保留周期我们亦可安排。gibco26400-044美国胎牛血清
透析血清:用12,000~14,000截留分子量的透析膜对0.15M的NaCl进行透析直到葡萄糖水平低于5mg/dl(用葡萄糖氧化酶/过氧化物酶方法检测)。为防止沉淀和血清中多肽的灭活,不进行过度的透析,因此一些小分子量的可透析成分如氨基酸不一定完全去除。
γ射线照射血清:可按客户要求对血清进行γ射线照射。通过γ射线照射以灭活各种动物血清中的病毒和支原体的方法已经得到证实。研究证实照射剂量在30-45kGy为宜。这一数据符合Zxin的欧洲和美国FDA的标准,证实血清被照射后物理化学特性和细胞培养表现没有改变。
[注意事项]
1.血清解冻:将血清从冰冻区中取出后(切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀),先置于2~8℃区域中使之融化,然后在室温下使之全融。使用前再预温到将使用的温度(如37℃),但必须注意的是,解冻过程中应轻轻地摇晃均匀。
血清在解冻过程中可能会出现少量絮状或片状析出物,主要是血清中脂蛋白的变性或是纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)析出,但这些析出物,并不影响血清本身的质量。若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。
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一、血清灭活问题。
1、问:加到培养基中的血清必须灭活吗?
答:不是必须的,看做什么实验了。
2、问:Gibco胎牛血清灭活是56℃30分钟吗?
答:如果用于培养大多数的肿瘤细胞,血清一般是不需要灭活的,这样可以有效保存血清中的生长因子。但是如果用于培养一些表面具有补体受体的细胞,如内皮细胞,血清是需要灭活,一般是56℃,30min。
3、问:我要做滋养细胞培养,Gibco澳洲胎牛血清要灭活吗?
答:Gibco澳洲胎牛血清有专门的热灭活型号,货号是10100147。
4、问:我用病毒上清转染细胞,培养用的血清需要灭活吗?因为血清中可能有些补体和抗体,是不是会影响转染?我想未灭活的血清中含些抗体补体可能会和病毒相结合,影响转染,正确吗?细胞是单核细胞白血病细胞,病毒是病毒包装细胞PT67收集的病毒上清。为什么要用无血清培养基加病毒孵育几小时,目的是什么?
答:血清一定要灭活,可以先用无血清培养基加病毒孵育几小时以后再加血清。避免杂蛋白对病毒和宿主结合过程的干扰,一般是2-6小时,根据细胞的状态决定。血清不一定需要灭活,灭活的目的是将血清中的补体灭活!这要根据实际情况而定,如果没有把握那就灭活吧,也不麻烦56度半个小时。
5、问:(1)我买的是Gibco北美胎牛血清,要灭活吗?有些说法是需要,有些说直接解冻后就可以加入到培养基中;我配制胰蛋白酶液,用的是D-PBS,有关系吗?
答:关于血清的热灭活,是很多人感兴趣也存在一定争议的话题。大多数实验室将血清的热灭活还是作为常规来执行,因为有两个作用,diyi是灭活补体,第二是灭HX清中可能存在的支原体。但是实验者并没有考虑热处理对血清中的生长因子、氨基酸等成分带来的负面影响。
我在实验室处理血清的时候,有一次水浴箱在灭活过程中出现故障,温度升高到80℃,血清变成了凝胶状,我重新处理了另外一份血清,将两份血清对比,发现高温直接影响到血清所含的抗体蛋白。在56℃下灭活半小时以上,肯定也会对里面的蛋白起到破坏作用。下次有机会我做个延长灭活时间的实验试试,看看到底有多大的影响。热灭活之后,血清放在四度冰箱久了,就会有沉淀产生,这常常会被认为是微生物污染或者是黑胶虫污染。为了验证到底有没有污染,常常又会把血清放置37℃温育,但是血清中的蛋白会进一步析出,Z后还是要做镜检,无菌培养试验,和革兰氏染色试验,非常麻烦。
我看过一份资料,里面提到70%的实验者认为灭活是理所当然的。常规灭活建议的温度在45℃到62℃之间,而时间则从15分钟到60分钟不等。其中Z常用的手法是56℃热处理30分钟。随着血清采集、处理、加工工艺的提高,许多早先认为是热灭活的原因已经不再成立,只有少数对血清进行热灭活的研究者在实验中证实了这一步骤的有效性和必要性。有人比较过11个不同细胞株,发现其中热灭活对6个细胞株(HBAE,MDBK,Vero,成纤维细胞,MRC-5)的生长带来负面影响,三个细胞株(FOX-NY,MDCK和CHO-K1)不受热灭活的影响,而只有两个细胞株(Balb/3T3,Sp2/0Ag14hybrid),在热灭活之后,细胞生长有轻微的改善。所以,在正常的操作下,热灭活通常对细胞的生长没有明显的促进作用。
你可以摸索一下,血清从-20℃冰箱拿出来之后在常温解冻,然后混匀分装成两份,一份灭活,一份不灭活,比较这两种血清对细胞是否有影响。然后再确定是灭活还是不灭活。这个过程Z多也就一个星期。同时你还要考虑血清灭活与否对你后续的实验有没有影响。
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