gibco胎牛血清 10438-026 北京

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细胞培养中出现黑点是污染吗?如何处理?
一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。
如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：
(1)细胞生长过老，破碎的细胞残骸;
(2)血清质量不好，反复冻融的结果;
(3)配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长;
(5)培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。
(4)配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点;
细胞培养中如何防止黑点生成
(1)尽可能地减少血清冻融次数。
(2)培养基无需37℃水浴。
(3)培养基保持Z佳PH值7.0-7.2。
(4)严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗。
(5)掌握细胞传代的Z佳时机，细胞切勿生长过老。
血清中包含絮状沉淀，它们是什么，怎么处理?
沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，不会影响产品性质。要除去沉淀，离心血清(400g，1-2分钟)或者简单的让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到另一个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以，使用产品时要摇动并加热血清至37℃，沉淀会自然消失。

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全部血清：收集的血液均在冷藏条件下处理。血清和凝块分离后立即将血清合并并冷冻。只有符合我们的检测标准的血清才被接受作进一步处理。
热灭HX清：热灭活是在56℃水浴中严格控温30分钟。
超低IgG胎牛血清：我们持有从血清中通过层析方法去除γ球蛋白的ZL。经过这种程序处理的血清只有极低的IgG浓度(小于5g/ml)但保持了血清的全部生物学活性。
透析血清：用12,000～14,000截留分子量的透析膜对0.15M的NaCl进行透析直到葡萄糖水平低于5mg/dl(用葡萄糖氧化酶/过氧化物酶方法检测)。为防止沉淀和血清中多肽的灭活，不进行过度的透析，因此一些小分子量的可透析成分如氨基酸不一定完全去除。
γ射线照射血清：可按客户要求对血清进行γ射线照射。通过γ射线照射以灭活各种动物血清中的病毒和支原体的方法已经得到证实。研究证实照射剂量在30-45kGy为宜。这一数据符合Zxin的欧洲和美国FDA的标准，证实血清被照射后物理化学特性和细胞培养表现没有改变。
［注意事项］
1.血清解冻：将血清从冰冻区中取出后（切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻，这样因温度改变太大，容易造成蛋白质凝集而出现沉淀），先置于2～8℃区域中使之融化，然后在室温下使之全融。使用前再预温到将使用的温度（如37℃），但必须注意的是，解冻过程中应轻轻地摇晃均匀。
血清在解冻过程中可能会出现少量絮状或片状析出物，主要是血清中脂蛋白的变性或是纤维蛋白（形成凝血的蛋白之一）析出，但这些析出物，并不影响血清本身的质量。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。

按如下操作可避免沉淀的产生：
(1)解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。
(2)血清分装冻存时，须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一。
(3)勿直接由-20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
(4)勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。
(5)血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。
(6)若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。

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一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。
如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：
(1)细胞生长过老，破碎的细胞残骸;
(2)血清质量不好，反复冻融的结果;
(3)配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长;
(5)培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。
(4)配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点;
(5)血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。
(6)若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。

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2004-09-27