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为什么要热灭HX清？加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭HX清。

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，其经过100nm过滤3次，内毒素和血红蛋白含量都可以与Hyclone的SH30070.03相媲美。可以用于培养大部分的干细胞系。

在常规动物细胞培养实验中所用到的细胞培养基往往需要加入胎牛血清。蛋白质是牛血清的主要成分，它对于细胞的生长起到关键的作用。我们常常听说的还有小牛血清，那么胎牛血清和小牛血清有没有区别?它们的不同点又在哪里呢?本文档明确定义了什么样的血清才是标准的胎牛血清，也说明了胎牛血清的功能到底有哪些?

关于血清的灭活与分装的方法：26400-044胎牛血清

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1、化冻
将血清从-20度冰箱中取出，室温（或浸于自来水中）化冻（约需要30分钟至2小时，也可放于4度冰箱化冻过ye；化冻后若不马上灭活，可以放入4度冰箱中暂时保存）
2、灭活
（1）放入室温的水浴锅内开始加热（同时放入一个空的血清瓶，内装100ml自来水，插入一根温度计，温度监控以此为准）
（2）当温度计显示56度时，停止加热，改为间断加热，维持56度（±0.5度）30分钟（±3分钟；若不小心使温度上升超过56度，则：若仍未超过60度，且时间很短，比如不超过5分钟，则仍可使用；若超过60度，或者时间较长，则弃去不用，或者尝SY于一些普通细胞的培养）
（3）取出，自然冷却至室温（约需1-3小时），可分装或-20度继续冻存。
3、分装
（1）转入无菌间，在超净台内将血清分装入10ml离心管中（注意预先要将血清轻轻摇动数周、混匀；用吸液管或吹大管吹出血清时要注意：不要吹出气泡（血清很粘稠，很容易产生气泡；如果产生气泡，则在酒精灯火焰上过一下））
（2）放入-20度冰箱冻存
（3）全部操作约需要4-6小时

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市场上的胎牛血清种类繁多，鱼龙混杂，很多科研工作者，特别是刚接触细胞培养的人，难以分辨血清质量的优劣。根据牛人十多年来血清生产销售的经验，总结如下：

一、外观
拿到血清，Zxian接触的是血清外观，对于缺少细胞培养经验的人来说，外观的判断尤为重要
1、颜色
根据血红蛋白含量的不同，胎牛血清可表现出黄色或红色，我国的细胞培养用血清标准是不高于20mg/dl，实际上，血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响，这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度，良好的操作能降低血清的溶血。
国产血清的采血点很分散，大多是由屠户采血后马上离心收集，所以很少会有溶血，表现出明亮的蜡黄色，当然，国产血清也很少有标准意义上的胎牛血清。
进口胎牛血清或多或少总有点溶血，因为真正的胎牛血清凝血功能差，红细胞容易破裂。
总的来说，国产的血清呈现出蜡黄。进口的血清，质量Z好的呈现出谈黄、微红色，如Gibco16000，差点的呈现出橘红色或鲜红色。当然，热灭HX清或保存不当的血清，由于血红蛋白的破坏氧化，会呈现出暗红，甚至咖-啡色。
2、沉淀
很多血清客户，会发现进口血清有沉淀，从而怀疑血清的质量问题，这是没有根据的。
血清中的沉淀是由纤维蛋白的凝聚产生，对血清质量没有任何影响，沉淀的产生原因很多，和厂家的加工生产方式密切相关。
国产的血清，大多来自北方，由于价格低廉，保存环境都不好，从采血、冷冻、运输到生产会经过多次冻融，每次冻融过程，就会析出部分纤维蛋白沉淀，这样，血清成品过滤后看起来反而更加的“干净”，很少有沉淀产生。
进口的胎牛血清，过滤分装前很少会反复冻融，生产后的成品也是清澈的，但随着时间的推移，血清中的大量纤维蛋白会析出形成沉淀。当然，进口的新生牛血清，一般牛龄都在2周左右，血清中的各种蛋白含量明显偏高，生产后血清可能会浑浊，甚至有大量沉淀。
当然，购买回来的血清都是冰冻状态，使用时需要融化，融化过程Z好在温度较低的状态下慢慢进行，否则沉淀相对较多，虽然沉淀并不直接影响血清的质量，但对细胞的显微观察有一定的阻碍。
3、澄清度
进口胎牛血清由于蛋白和脂类等物质含量低，表现为稀薄、清淡，而国产血清，因为绝大多数是新生牛血清，相对而言更加粘稠，颜色略深，这对于初步接触血清的人很难判断，但把两者进行对比，可容易分辨。
二、主要技术指标
目前国内血清的质量标准是2005版的《中华人民共和国药典》，主要指标有以下几点：
1、内毒素
标准为不高于5EU/ml。内毒素是细菌破碎后细胞壁的成分，因此内毒素含量的高低可表现出采血到生产一系列过程中的无菌操作情况。目前，国产血清基本都能达到这一要求，很多进口胎牛血清内毒素含量反而更高，如Gibco26140，只要求不高于50EU/ml，高出我国标准10倍，即使是16000，也要10EU/ml，血清质量也未见影响。可见，内毒素含量偏高不影响质量，除非含量极高，预示着已经污染。
2、总蛋白含量
胎牛血清一般范围是30-40mg/ml，数值偏高，说明采血的牛龄偏大，不是胎牛，数值偏低，表明血清可能掺水了。
3、血红蛋白
标准为不高于20mg/dl，颜色越红，数值越高，反之，数值越低。
4、pH
国产血清，大多高于7.5，进口胎牛血清，大多低于7.5，具体原因未知，可能和牛龄有关，这也能用来初步鉴别血清的来源。
5、微生物
包括细菌、霉菌、支原体、噬菌体、各类病原性病毒等。随着国内血清厂家生产条件的改善提高，细菌、霉菌等“大型”微生物几乎能1**%控制，支原体经过0.1um过滤，大多也能清除。大肠杆菌噬菌体的污染还是比较严重的，主要是生产环境过程中带入，又无法过滤，很难彻底清除，但对血清质量影响不大。病原性病毒，特别是BVDV，在国产血清中几乎90%以上都存在，这类微生物是影响国产血清质量的重要因素之一，而进口胎牛血清中基本都控制的很好。
6、免疫球蛋白
国产血清的只是定性检测，结果也很不准确，进口胎牛血清大多定量检测。免疫球蛋白的数值能完全体现出采血的时的牛龄情况，国产血清，基本都是新生牛的，血清中容易产生IgM，IgG的含量也偏高，进口胎牛血清，不含IgM，IgG的含量也较低。
7、其它
不管是国产还是进口血清，都是不测抗生素的(无四环素胎牛血清除外)。国外，抗生素的使用很严格，用量也很少，每头奶牛的产品包括血清都可以溯源的，因此可以做到胎牛血清中不含抗生素或含量极低;国内，抗生素的滥用已成了普遍现象，血清中残留很高，对细胞培养极为不利，这是国产血清质量差的根本原因。

Gibco胎牛血清使用中遇到的常见问题总结

一、血清灭活问题。

1、问：加到培养基中的血清必须灭活吗？

答：不是必须的，看做什么实验了。

2、问：Gibco胎牛血清灭活是56℃30分钟吗？

答：如果用于培养大多数的肿瘤细胞，血清一般是不需要灭活的，这样可以有效保存血清中的生长因子。但是如果用于培养一些表面具有补体受体的细胞，如内皮细胞，血清是需要灭活，一般是56℃，30min。

3、问：我要做滋养细胞培养，Gibco澳洲胎牛血清要灭活吗？

答：Gibco澳洲胎牛血清有专门的热灭活型号，货号是10100147。

4、问：我用病毒上清转染细胞，培养用的血清需要灭活吗？因为血清中可能有些补体和抗体，是不是会影响转染？我想未灭活的血清中含些抗体补体可能会和病毒相结合，影响转染，正确吗？细胞是单核细胞白血病细胞，病毒是病毒包装细胞PT67收集的病毒上清。为什么要用无血清培养基加病毒孵育几小时，目的是什么？

答：血清一定要灭活，可以先用无血清培养基加病毒孵育几小时以后再加血清。避免杂蛋白对病毒和宿主结合过程的干扰，一般是2-6小时，根据细胞的状态决定。血清不一定需要灭活，灭活的目的是将血清中的补体灭活！这要根据实际情况而定，如果没有把握那就灭活吧，也不麻烦56度半个小时。

5、问：(1)我买的是Gibco北美胎牛血清，要灭活吗？有些说法是需要，有些说直接解冻后就可以加入到培养基中；我配制胰蛋白酶液，用的是D-PBS，有关系吗？

答：关于血清的热灭活，是很多人感兴趣也存在一定争议的话题。大多数实验室将血清的热灭活还是作为常规来执行，因为有两个作用，diyi是灭活补体，第二是灭HX清中可能存在的支原体。但是实验者并没有考虑热处理对血清中的生长因子、氨基酸等成分带来的负面影响。

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2004-09-27