分子杂交(molecular hybridization)是指使单链核酸碱基序列确定的技术。待测单链核酸与已知序列的单链核酸(叫做探针)间通过碱基配对使可检出的双螺旋片段形成为分子杂交的基本原理。下面就让小编带你了解一下Southern杂交方法。
探针概念
一段带有检测标记已知的核苷酸序列,其和目的基因或者目的DNA特异互补。
制备方法
50-300bp通常为合适的长度,有时长度达到1.5kb。
1.化学合成
2.PCR扩增
3.DNA重组技术
分类
按照不同的性质和来源,探针包括以下几类:
1.寡核苷酸探针
2.RNA探针
3.cDNA探针
4.基因组DNA探针
核酸分子杂交方法
根据待测核酸是否在固相支持物上固定来分可以分为:
1.液相杂交
(1)核酸酶S1保护分析法
(2)RNA酶保护分析法
2.固相杂交
(1)原位杂交
(2)膜上印迹杂交
根据分子种类来分可以分为:
(1)Western印迹杂交
(2)Northern印迹杂交
(3)Southern印迹杂交
标记的种类
1.非同位素
荧光素、地 高 辛配体以及生物素等标记物
2.同位素
125I、3H、35S以及32P等标记探针
寡核苷酸探针合成的注意事项
1.如果和非靶序列有连续8个以上的相同碱基序列或者有超过百分之七十同源性,那么不用为好。
2.防止连续出现同一碱基
3.探针内防止互补
4.G:C对含量Z好在百分之四十到百分之六十之间。
5.长度Z好在10到50bp之间。
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