Southern杂交方法

分子杂交（molecular hybridization）是指使单链核酸碱基序列确定的技术。待测单链核酸与已知序列的单链核酸（叫做探针）间通过碱基配对使可检出的双螺旋片段形成为分子杂交的基本原理。下面就让小编带你了解一下Southern杂交方法。

通过限制性内切酶切割后的DNA片段中是否有与探针同源的序列存在可以使用Southern杂交来检测。

检测步骤：

1.对DNA进行酶切，凝胶电泳使各个酶切的片段分离，再原位变性DNA。

2.在硝酸纤维素滤膜或尼龙膜等固体支持物上接收转移的DNA片段。

3.对滤膜进行预杂交，将滤膜上非特异性位点掩盖。

4.杂交探针与同源DNA片段，之后将非特异性结合的探针通过漂洗去除。

5.根据显影来对目的DNA所在的位置进行检测。

DNA的转移方法：

1.真空转移

进行真空转移的商品化仪器有很多，它们通常是在真空室上面的多孔屏上放置硝酸纤维素膜或尼龙膜，再在滤膜上放置凝胶，从上面的一个贮液槽中流下缓冲液，将凝胶中的DNA洗脱出来，使其在滤膜上沉积。

优点：

迅速为这种方法的优点，从正常厚度(4-5mm)和正常琼脂糖浓度(<1%)的凝胶中定量地转移出来的时间能够只在半小时之内。和Southern转移相比，其转移后得到的杂交信号要2-3倍于Southern转移的信号。

缺点：

若操作不够仔细，会造成凝胶碎裂，并且不严格洗膜，其背景要高于毛细转移。

2.电泳转移

变性DNA之后，可以在带电荷的尼龙膜上接受DNA。

优点：

能够直接对较大的DNA片段进行转移。

缺点：

在转移的过程中会产生较大的电流，很难对温度进行控制。一般只有当真空转移和毛细管转移没有效果的时候，电泳转移才会被使用。

3.毛细管转移

该方法是Southern发明的，因此，有被叫做Southern转移。

优点：

该方法的优点就是操作简单，。

缺点：

该方法转移需要耗费比较长的时间，在转移号，杂交信号也不强。

影响因素

对Southern杂交能否检出杂交信号产生影响的因素有很多，主要包含以下几点：

1.探针与目的DNA间的配对情况

2.转移到滤膜上DNA的量

3.探针的大小和比活性

4.目的DNA在总DNA中所占的比例