大肠杆菌的一般的培养方法

大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli） 革兰氏阴性短杆菌，大小0.5×1～3微米。周生鞭毛，能运动，无芽孢。能发酵多种糖类产酸、产气，是人和动物肠道中的正常栖居菌，婴儿出生后即随哺乳进入肠道，与人终身相伴，几乎占粪便干重的1/3。下面让小编为你介绍一下大肠杆菌的一般培养方法。

培养基准备：

使用牛肉膏蛋白胨培养基，组成成分：琼脂15～20g,Nacl5g,牛肉膏3g,蛋白胨10g,水1000mL,PH值7.4～7.6。

配置步骤：

1.称药品

计算实际用量，根据配方称取各种药品然后将它们放入大烧杯中，可以将牛肉膏放在小烧杯或表面皿中进行称量，用热水溶解后往大烧杯里倒入。也可以将牛肉膏放在称量纸上称量，之后放入热水中，使得牛肉膏与称量纸分离，然后立即将纸片取出，蛋白胨非常容易吸潮，所以称量时动作要快。

2.加热溶解

将低于所需要的水量加入到烧杯中，然后将在石棉网上放上烧杯，用小火加热，并且用玻棒搅拌,等到药品完全溶解后，再往烧杯内加水到所需要的水量。如果配制固体培养基,那么向已经溶解的药品中加入称好的琼脂，再加热融化,这个过程，需要持续搅拌，避免防琼脂糊底或溢出，Z后补充失掉的水分。

3.调pH

对培养基的pH进行检测，如果pH偏酸,那么可以滴加NaOHlmol/L，一边滴加一边搅拌,并且随时用pH试纸对的pH进行检测，一直到pH在所需pH范围为止。如果pH偏碱，那么就用1mol/LHCl进行调节，一般在加琼脂之前进行pH的调节，需要注意pH值不要调过头,避免因为回调而对培养基内各离子的浓度产生影响。

4.过滤

可以使用滤纸过滤液体培养，可以用4层纱布对固体培养基进行趁热过滤，对于观察培养有好处。然而如果是供一般使用的培养基,那么可以省略这一步。

5.分装

根据实验要求，能够通过试管或三角瓶内对配制的培养基进行分装，为了防止培养基沾在管口或瓶口上而导致污染，分装时可以使用漏斗。分装量：固体培养基大约是试管高度的l/5,在灭菌后制成斜面，往三角瓶内进行分装，容积不超过其的一半Z为恰当。半固体培养基占试管高度的1/3比较适合。灭菌后垂直待凝。

6.加棉塞

用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞塞在试管口和三角瓶口上，要选择形状,大小和松紧度均合适的棉塞，为了起到避免杂菌侵入和有利通气的作用，棉塞四周要紧贴管壁,不留缝隙。棉塞总长约3/5要3/5塞入试管口或瓶口内,防止棉塞脱落。一些微生物需要更好的通气，那么需要使用8层纱布制成通气塞，有时候也能用试管帽或塑料塞代替棉塞。

7.包扎

为了避免灭菌时冷凝水沾湿棉塞，需要在加塞后用一层牛皮纸或双层报纸将三角瓶的棉塞外表面包住。如果养基分装于试管中，那么应该将5支或7支放在一起，再用牛皮纸将棉塞外包住，用绳扎好，然后将培养基名称,组别,日期用记号笔注明。

8.灭菌

在121.3℃湿热灭菌上述培养基20min，如果由于特殊情况不能及时灭菌，那么应该暂时存放在冰箱里。

9.无菌检查

在37℃温箱中培养24～48h灭菌的培养基，无菌生长立刻就能够使用，或者将其在冰箱或清洁的橱内贮存备用。

大肠杆菌的培养：

在37摄氏度条件下进行48到72小时的恒温培，由于不同的接种和具体培养条件不同，所以明显的菌落通常均是在2天以后才会长出。乳白色，圆形，菌落边缘整齐，表面光滑，表面和背面颜色一致是菌落的特征。