细胞培养箱消毒灭菌

细胞培养箱

　　细胞培养箱是开展免疫学、肿瘤学、遗传学及生物工程所必须的关键设备，细胞培养箱广泛应用于细胞、组织培养和某些特殊微生物的培养，常见于细胞动力学研究、哺乳动物细胞分泌物的收集、各种物理、化学因素的致癌或毒理效应、抗原的研究和生产、培养杂交瘤细胞生产抗体、体外授精(IVF)、干细胞、组织工程、药物筛选等研究领域。

细胞培养箱的污染来源

　　对于细胞来说，非常理想的培养环境同样也适合这些污染物的生存，培养箱本身是不会辨别的，而细胞培养中大部分时间里细胞都是位于培养箱内，因此箱体内能否抑jun或灭菌非常关键!

　　细胞培养箱中的主要污染源：细菌、真菌(霉菌和酵母菌)、病毒、支原体、非同种细胞。

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　　支原体：支原体污染后，因为它们不会使细胞死亡可以与细胞长期共存，培养基一般不发生浑浊，细胞无明显变化，外观上给人以正常感觉，实则细胞已经受到多方面潜在影响，如引起细胞变形，影响DNA合成，yi制细胞生长等，往往被大多数实验者忽视。

　　细菌：细菌污染后，培养基1-2天就会变色，对细胞生长影响明显，应迅速将污染细胞与其它细胞系隔离，灭菌后丢弃，还要用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台。

　　病毒：由于病毒寄生生存，爆发后尽快和正常细胞隔离，丢弃处理，相对来说容易处理，对操作者威胁较大;尽管病毒污染的细胞不影响原代培养，但生产疫苗是不安全的。因此，潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题。

　　真菌(霉菌和酵母菌)：真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了;目前没有好的yi制方法，包括现在常用的两性霉素，一旦污染容易反复爆发，尤其孢子很难杀灭。

　　非同种细胞：即细胞交叉污染，由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开，往往会使一种细胞被另一种细胞污染。目前，世界上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染，致使许多实验宣告无效。

细胞培养箱的消毒灭菌

　　细胞培养箱的灭菌和消毒方法有化学消毒、干热灭菌以及湿热灭菌。

　　化学消毒法：

　　针对细胞培养箱的灭菌和消毒，采用化学消毒只能是易挥发没有残留的普通试剂(如酒精)，而酒精的只对部分细菌繁殖体等微生物有去除效果，只能作为一种辅助消毒灭菌方法，对于孢子及病毒起不到杀灭的作用;如果采用毒性较大的化学试剂(如双氧水、环氧乙烷等)，在消毒处理后将会产生残留，对细胞培养箱的培养环境带来化学污染，影响后续的培养。

　　干热法灭菌：

　　干热法灭菌是指将细胞培养箱的箱体内加热到120摄氏度以上的高温，湿度为20%以内，持续一定的时间(2小时)，通过高温是蛋白质及核算变性失活，达到杀灭的目的;但干热对于箱体内其他部件要求能耐受高温，对于传感器等部件必须取出，有可能带来二次污染，并且有些真菌芽孢，由于厚厚的细胞壁保护，能够抵抗一定的高温，灭菌不能彻底。

　　湿热灭菌：

　　湿热灭菌是指在高温的同时保持细胞培养箱箱体内饱和湿度，可以降低加热温度，同时达到彻底灭菌效果。

　　湿热灭菌相比于干热灭菌，主要区别是：

　　①湿热灭菌中的菌体吸收水分，蛋白质含水量高，所需凝固温度降低，易凝固变性;

　　②高温水蒸汽对蛋白质有高度的穿透力，从而加速蛋白质变性而迅速死亡;

　　③三是湿热的蒸汽有潜热存在，能迅速提高被灭菌体的温度，从而增加灭菌效力。

　　由此可见，细胞培养箱采用湿热灭菌是一种可行且效果的灭菌方法，能彻底消灭细菌、真菌、孢子、病毒等微生物，防止环境对箱体内污染和不同培养对象间的交叉污染;同时相比于化学消毒方式灭菌效果更为彻底、且没有残留;相比于干热灭菌，可以降低灭菌的温度，加大灭菌的彻底性，且没有二次污染。