蛋白质提取与纯化技术

蛋白质提取与纯化技术

蛋白质的分离纯化

蛋白质的分离纯化方法很多，主要有：

（一）根据蛋白质溶解度不同的分离方法

1蛋白质的盐析
中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称盐析，将大量盐加到蛋白质溶液中，高浓度的盐离子（如硫酸铵的SO4和NH4)有很强的水化力，可夺取蛋白质分子的水化层，使之失水，于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出盐析时若溶液pH在蛋白质等电点则效果更好由于各种蛋白质分子颗粒大小亲水程度不同，故盐析所需的盐浓度也不一样，因此调节混合蛋白质溶液中的中性盐浓度可使各种蛋白质分段沉淀
影响盐析的因素有：（1）温度：除对温度敏感的蛋白质在低温（4度）操作外，一般可在室温中进行一般温度低蛋白质溶介度降低但有的蛋白质（如血红蛋白肌红蛋白清蛋白）在较高的温度（25度）比0度时溶解度低，更容易盐析（2）pH值：大多数蛋白质在等电点时在浓盐溶液中的溶介度Zdi（3）蛋白质浓度：蛋白质浓度高时，欲分离的蛋白质常常夹杂着其他蛋白质地一起沉淀出来（共沉现象）因此在盐析前血清要加等量生理盐水稀释，使蛋白质含量在2.5-3.0%