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DNA电泳常见问题分析

北京六一生物科技有限公司 2020-09-02

一、DNA带模糊

原因:

1.DNA降解;

2.电泳缓冲液陈旧;

3.所用电泳条件不合适;

4.DNA上样量过多;

5.DNA样含盐过高;

6.有蛋白污染;

7.DNA变性。

解决办法:

1.避免核酸酶污染;

2.电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低,pH值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液;

3.电泳时电压不应超过20V/cm,温度<30℃;巨大DNA链电泳,温度应<15℃;核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力;

4.减少凝胶中DNA上样量;

5.电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐;

6.电泳前酚抽提去除蛋白;

7.电泳前勿加热,用20mM NaCI缓冲液稀释DNA。


二、带弱或无DNA带

原因:

1.DNA的上样量不够;

2.DNA降解;

3.DNA走出凝胶;

4.对于EB染色的DNA,所用光源不合适。

解决办法:

1.增加DNA的上样量;聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度稍高,上样量可适当降低;

2.避免DNA的核酸酶污染;

3.缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度;

4.应用短波长(254nm)的紫外光源。


三、DNA带缺失

原因:

1.小DNA带走出凝胶;

2.分子大小相近的DNA带不易分辨;

3.DNA 变性;

4.DNA链巨大,常规凝胶电泳不合适。

解决办法:

1.缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度;

2.增加电泳时间,核准正确的凝胶浓度;

3.电泳前请勿高温加热DNA链,以20mM NaCl Buffer稀释DNA;

4.在脉冲凝胶电泳上分析。





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