基于Naica数字PCR技术解析Favipiravir药物抗B型流感病毒

病毒性肺炎（viral pneumonia）是由病毒侵犯肺实质细胞而造成的肺部炎症，常由上呼吸道病毒感染向下蔓延引起。随着呼吸道病毒检测技术的进步，病毒性肺炎的发病率和死亡率逐渐得到认识，研究人员发现流感病毒感染占病毒性肺炎患者的大多数。流感病毒是季节性流感和偶发性流感大流行的病原体。世卫组织估计，流行病每年导致约300-500万严重病例，约有29万-65万人死于呼吸道疾病。目前流行的季节性流感病毒包括A型的H1N1和H3N2以及B型。已有报道指出，平均每个季节由B型流感病毒引起的病例占流感相关死亡的29%，而在B型流感高发期，这一比例高达95%。

目前，ZL流感病毒感染的药物主要有两种，分别是M2离子通道阻滞剂(金刚烷胺、金刚乙胺)和神经氨酸酶YZ剂NAIs(奥司他韦、扎那米韦、帕拉米韦和拉尼米韦)。由于广泛耐药的出现和对B型流感病毒缺乏LX，M2离子通道阻滞剂不再推荐使用；因此，NAIs成为抗病毒的药物的主要类别。然而，耐NAIs突变体的出现仍会降低其LX。因此，对耐NAIs突变体的研究变得至关重要。

近日，ZG疾病预防控制ZX病毒病预防控制所国家流感ZX（世界卫生组织流感参比和研究合作ZX）等联合在《Virology》发表了名为Effectiveness of favipiravir (T-705) against wild-type and oseltamivir-resistant influenza B virus in mice的文章。Favipiravir法维吡韦也称为T-705，靶向流感病毒的RNA依赖的RNA聚合酶RdRp，可YZA，B和C型流感病毒，包括耐奥司他韦的菌株。该研究在其基础上检测了T-705对耐奥司他韦B型流感的功效。

在这项研究中，研究人员使用致死小鼠模型评估了T-705对野生型和耐奥司他韦的乙型流感病毒的影响。此外还评估了体内药物ZL后是否发生了诱导对T-705敏感性降低的突变。结果显示T-705以剂量依赖的方式保护小鼠免于致命感染。T-705还能显著降低病毒载量和YZ肺病理学。此外，表型分析显示T-705耐药病毒在T-705处理后没有出现，即T-705可以有效地保护小鼠免受野生型和对奥司他韦具有耐药性的B型流感病毒的致命感染。

文中使用Naica Crystal Digital PCR系统评估了T-705对野生型和耐奥司他韦的小鼠呼吸道病毒载量的影响，具体为测定了小鼠肺部、鼻甲骨、气管（对应下面两幅图的C/E/F）中流感病毒的非结构蛋白1 (NS1)基因拷贝数。

法国Stilla Technologies Naica数字PCR平台是实现DNA/RNA定量的技术工具，自动生成和组装单层平铺的微滴，进行单分子PCR扩增，通过高分辨率的三色荧光通道检测，自动QC质控，识别三色荧光中有效的阴阳性微滴，从而达到目的DNA/RNA的定量检测。同时提供原始数据、单微滴追溯等功能，确保数据真实可靠。

◐ 只需一步加样操作，无需标准品和标准曲线是真正的定量系统。通过对模板的有限稀释，耐受YZ剂能力强，更有利于临床、环境等复杂样本的检测。

◐ 有效微滴：25000~30000/样本，实现低浓度、低丰度的核酸样本进行准确定量。

◐ 封闭式芯片设计，样本间独立，避免了加样交叉污染风险，同时防止扩增后的气溶胶污染，保证结果安全可靠和实验环境安全。