仪器社区

抗体药研发与免疫原性的刀光剑影

默克化工技术(上海)有限公司 2019-12-06

       仇视,博弈,对决,厮杀,像极了武侠小说中的精彩场景,又《边城将》:“刀含四尺影;剑抱七星文。”,剑拔nu张,一片刀光剑影。

diyi章

抗体药腥风血雨

       正如我们今天要聊的抗体药研发,由大分子药物,小分子及多肽类药物,甚至是相关佐剂都可能直接或者间接引起比较大的免疫原性反应,轻者可能项目止步于临床前期甚至临床期,对经济投入可谓压力山大;重者则可能会降低药物LX,引起过敏反应,甚至威胁生命安全。故ADA(Anti-Drug-Antibody)——在PK研究的有效检测,即系统性、科学性地完成ADA检测是PK研究的迫切问题。

       近年来经常会有各种抗体药研发的新闻见诸报端,该市场可谓如火如荼,正值高光时期,从各大单抗药企的社会责任来看,正不遗余力解决民生问题,甚感欣慰。


第二章  

ADA检测、免疫原性指导,

你需要知道这些

       那我们遵循规则,来探讨一下ADA检测的特点,继2009版免疫原性指导原则之后,2016版FDA《免疫原性指导原则(试行)》的发布给免疫原性分析指明了方向,把两个相隔7年的制度原则进行比较,即可得到以下几点特征:

综合几点,即FDA对免疫原性的评估指导给出了具体要求:


第三章

FDA的高要求,我们如何应对?

       结合以上几点特征,我们来看看目前通用的检测方法:

       对于抗体研究发展趋势,鼠源向人源化—全人抗体—多功能化(双/多特异性抗体)--小型化(抗体片段/肽段)--jing准化(抗体/药物偶联物-ADC),对分析技术的要求越来越高。

       常规分析技术一般包括直接或桥接酶联免疫吸附分析(ELISA)、电化学发光法(ECLA)、放射免疫沉淀分析(RIPA)、表面等离子体共振(SPR)等,可采取一种或几种组合。但由于受限于目前的技术瓶颈(如ELISA-酶联免疫法,ECLA-电化学发光法)检测灵敏度,即检测背景的受限和反应性检出能力的受限,再结合ADA的阶段性特点,不同时间段的抗体亚型存在差异性的;而且机体在给药后药物以及内源性分子浓度水平的“干扰”均会影响分析结果,故抗药性抗体分析方法应准确、灵敏、特异、耐用,能检测出包括IgG和IgM等所有亚型,同时基于风险采用多层次检测策略评价ADA,按照筛选分析、确证分析、中和分析等进行逐层分析。


第四章

秘籍出世——

默克帮您应对ADA检测的挑战

       目前默克生命科学依托其SMC单分子超高灵敏度检测平台,专门开发了ADA检测的专用方法学开发用检测试剂盒。

图1:SMCTM免疫原性检测及开发试剂盒(Cat.No.03-0175-00).jpg

图1:SMCTM免疫原性检测及开发试剂盒(Cat.No.03-0175-00)

1.jpg

图2:单分子计数,精确计数光子数量.jpg

图2:单分子计数,精确计数光子数量

图示3:Biotin-drug/AF-drug等摩尔滴定抗兔多抗呈阳性反馈,曲线设置12个点,CV<20%.jpg

图示3:Biotin-drug/AF-drug等摩尔滴定抗兔多抗呈阳性反馈,曲线设置12个点,CV<20%

图示4:Biotin-drug/AF-drug等摩尔滴定N/S Ratio,红色框中ADA在23.44ng/mL浓度下的表现出较好的信噪比和动.jpg

图示4:Biotin-drug/AF-drug等摩尔滴定N/S Ratio,红色框中ADA在23.44ng/mL浓度下的表现出较好的信噪比和动

图5:为基质耐受检测,A为运行基质浓度为20%,10%,5%,0%的响应值,B为信噪比反馈.jpg

图5:为基质耐受检测,A为运行基质浓度为20%,10%,5%,0%的响应值,B为信噪比反馈

图6:对于标曲反馈,20%Matrix(1:5) Biotin-drug0.025µg/mL和AF-drug 0.025µg/mL为Z佳的确认结果.jpg

图6:对于标曲反馈,20%Matrix(1:5) Biotin-drug0.025µg/mL和AF-drug 0.025µg/mL为Z佳的确认结果

图7:相较传统ECL法,SMC检测灵敏度提高了十倍(从195ng/mL提升到20ng/mL).jpg

图7:相较传统ECL法,SMC检测灵敏度提高了十倍(从195ng/mL提升到20ng/mL)

20191206-972254576.jpg

*数据源于50只药物诱导猕猴样本

图8:数据表明没有证据证明hook效应会影响浓度低于100,000ng/mL的低敏感性范围.jpg

图8:数据表明没有证据证明hook效应会影响浓度低于100,000ng/mL的低敏感性范围

图9:药物耐受性检测:结果显示该实验降低了循环ZL的耐受性,可检出在0.125µg/mLMAb中约97.7ng/mL的ADA浓度.jpg

图9:药物耐受性检测:结果显示该实验降低了循环ZL的耐受性,可检出在0.125µg/mLMAb中约97.7ng/mL的ADA浓度


终章

结果的精确与否,就在你一念之间

       SMC的优势到底在哪里?

       看看你的结果,如果和FDA的要求相差甚远,SMC或许可以帮你找到答案。

       SMC技术相较于当前的ADA检测金标准提升了至少10倍的检测灵敏度。

       相较当前的方法可降低基质耐受并保持一致的药物耐受性。

       极大的降低试剂的消耗成本并可保持稳定的检测动力学范围。

       当前的数据并未做过多的优化,用户仍可通过试剂盒中标配的优化buffer进行进一步优化以实现更好的性能反馈。

       SMC提升ADA检测灵敏度有助于在免抗疫亲和力成熟和ADA类型转换之前检出ADA浓度。





评论
全部评论
您可能感兴趣的社区主题
加载中...
发布 评论