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ibidi应用指南|免疫荧光实验

上海净信实业发展有限公司 2022-12-15 16:35:43 219  浏览
  •   免疫荧光实验原理

      

      免疫荧光(IF)是使用显微镜深入了解细胞结构和过程的有效方法。此方法可评估特定蛋白质的表达和位置,使得免疫荧光成为科学家解决许多细胞生物学问题不可或缺的工具。

      

      免疫荧光实验基于以下主要步骤:

      

      1.特异性抗体与感兴趣的蛋白质结合。

      

      2.荧光染料与这些免疫复合物偶联,以便使用显微镜观察感兴趣的蛋白质。

      

      

      内皮细胞中vWF的免疫荧光染色。肌动蛋白用phalloidin染色(绿色),细胞核用DAPI染色(蓝色)。

      

      区分直接和间接免疫荧光。在直接免疫荧光中,一抗直接偶联到荧光团(也称为荧光色素),便于处理和快速可视化。在间接免疫荧光中,使用特异性结合一抗的二级荧光团偶联抗体来可视化感兴趣的结。

      

      尽管di二种方法比直接免疫荧光更耗时,但它有几个显著的优势,比如它通常更便宜,因为二抗可以用于不同的一抗。此外,通过结合多个一抗和特定的二抗(每个抗体都用不同的荧光团标记),可以在单个样品中平行特异地显示多个蛋白质(多色免疫荧光)。

      

      

      免疫荧光染色:典型的工作流程

      

      每个免疫荧光染色方案由培养、固定、染色、成像四个主要步骤组成,可细分如下:

      

      

      免疫荧光染色是一种非常敏感的方法,可能需要排除故障《免疫英冠染色故障排除指南》。方案中的微小变化可能会导致不同的结果,而这些结果不再具有可比性。因此,在您的特定方案中精确地保持完全相同的条件是非常重要的(例如,细胞密度、抗体稀释度、培养温度和培养时间)。

      

      

      免疫荧光实验方案对比

      

      传统染色与ibidi方案染色

      

      当使用任何ibidi解决方案时,ibidi的免疫荧光染色方案比传统方案要简便快速的多。无需在松散的盖玻片上生长细胞,细胞可直接在ibidi玻片上生长和染色。

      

      

      

      用于免疫荧光应用的各种ibidi产品

      

      

      更多ibidi相关产品的免疫荧光实验应用可查阅我们雷萌公众号相关文章!

      

      参考文献

      

      K.G. Zyner, A. Simeone, S.M. Flynn, et al. G-quadruplex DNA structures in human stem cells and differentiation. Nat Commun, 2022, 10.1038/s41467-021-27719-1

      

      C. Xu, et al. NPTX2 promotes colorectal cancer growth and liver metastasis by the activation of the canonical Wnt/beta-catenin pathway via FZD6. Cell Death & Disease, 2019, 10.1038/s41419-019-1467-7

      

      Kobayashi, T., et al. Principles of early human development and germ cell program from conserved model systems. Nature, 2017, 10.1038/nature22812

      

      H. Tada et al. Porphyromonas gingivalis Gingipain-Dependently Enhances IL-33 Production in Human Gingival Epithelial Cells. PloS one, 2016, 10.1371/journal.pone.0152794

      

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ibidi应用指南|免疫荧光实验

  免疫荧光实验原理

  

  免疫荧光(IF)是使用显微镜深入了解细胞结构和过程的有效方法。此方法可评估特定蛋白质的表达和位置,使得免疫荧光成为科学家解决许多细胞生物学问题不可或缺的工具。

  

  免疫荧光实验基于以下主要步骤:

  

  1.特异性抗体与感兴趣的蛋白质结合。

  

  2.荧光染料与这些免疫复合物偶联,以便使用显微镜观察感兴趣的蛋白质。

  

  

  内皮细胞中vWF的免疫荧光染色。肌动蛋白用phalloidin染色(绿色),细胞核用DAPI染色(蓝色)。

  

  区分直接和间接免疫荧光。在直接免疫荧光中,一抗直接偶联到荧光团(也称为荧光色素),便于处理和快速可视化。在间接免疫荧光中,使用特异性结合一抗的二级荧光团偶联抗体来可视化感兴趣的结。

  

  尽管di二种方法比直接免疫荧光更耗时,但它有几个显著的优势,比如它通常更便宜,因为二抗可以用于不同的一抗。此外,通过结合多个一抗和特定的二抗(每个抗体都用不同的荧光团标记),可以在单个样品中平行特异地显示多个蛋白质(多色免疫荧光)。

  

  

  免疫荧光染色:典型的工作流程

  

  每个免疫荧光染色方案由培养、固定、染色、成像四个主要步骤组成,可细分如下:

  

  

  免疫荧光染色是一种非常敏感的方法,可能需要排除故障《免疫英冠染色故障排除指南》。方案中的微小变化可能会导致不同的结果,而这些结果不再具有可比性。因此,在您的特定方案中精确地保持完全相同的条件是非常重要的(例如,细胞密度、抗体稀释度、培养温度和培养时间)。

  

  

  免疫荧光实验方案对比

  

  传统染色与ibidi方案染色

  

  当使用任何ibidi解决方案时,ibidi的免疫荧光染色方案比传统方案要简便快速的多。无需在松散的盖玻片上生长细胞,细胞可直接在ibidi玻片上生长和染色。

  

  

  

  用于免疫荧光应用的各种ibidi产品

  

  

  更多ibidi相关产品的免疫荧光实验应用可查阅我们雷萌公众号相关文章!

  

  参考文献

  

  K.G. Zyner, A. Simeone, S.M. Flynn, et al. G-quadruplex DNA structures in human stem cells and differentiation. Nat Commun, 2022, 10.1038/s41467-021-27719-1

  

  C. Xu, et al. NPTX2 promotes colorectal cancer growth and liver metastasis by the activation of the canonical Wnt/beta-catenin pathway via FZD6. Cell Death & Disease, 2019, 10.1038/s41419-019-1467-7

  

  Kobayashi, T., et al. Principles of early human development and germ cell program from conserved model systems. Nature, 2017, 10.1038/nature22812

  

  H. Tada et al. Porphyromonas gingivalis Gingipain-Dependently Enhances IL-33 Production in Human Gingival Epithelial Cells. PloS one, 2016, 10.1371/journal.pone.0152794

  

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2022-12-15 16:35:43 219 0
ibidi:免疫荧光染色故障排除指南

  01、故障排除

  免疫荧光染色是一种非常敏感的方法,需要大量的经验和不断优化。方案中微小的变化可以显着改变结果。如果遇到低信号、无信号或高背景,请参阅以下故障排除指南:

 

  高背景:

 

  02、ibidi解决方案

 

  用于倒置显微镜的具有盖玻片底部的ibidi μ-Slides腔室载玻片和μ-Dishes培养皿有多种几何形状可供选择,可满足您对免疫细胞化学的任何特定需求。所有免疫荧光染色步骤都可以直接在载玻片或培养皿中进行。


  ibidi通道载玻片的几何形状非常适合精确交换少量的培养基,这在免疫细胞化学染色过程中是必要的。此外,通道µ-Slides的盖玻片底部无需额外的盖玻片。

 

  在ibidi腔室载玻片中,带有可移除的硅胶培养小室安装在标准玻璃盖玻片上,非常适合长时间样品保存。

 

 

  03、低信号或无信号

2022-10-17 16:08:19 213 0
ibidi产品科普小知识:免疫荧光问题集锦

  
  货号:80381
  
  1.没有 15 mm 玻璃盖玻片可以使用3 孔可移除的腔室载玻片吗?
  
  可以的。在此腔室载玻片中可以在没有 15 mm 玻璃盖玻片的情况下使用1.1 ml的体积。为减少体积而使用 15 mm 玻璃盖玻片只是一种选择。
  
  
  2.免疫荧光3 孔 | 8 孔 | 12 孔可移除腔室载玻片的硅胶围栏可以重复使用吗?
  
  不建议重复使用免疫荧光腔室载玻片的硅胶围栏。虽然这两种材料都可高温高压灭菌并与酒精兼容,但 ibidi 仅保证产品一次性使用的粘合能力。
  
  3.封片剂能否用于ibidi免疫荧光3 孔 | 8 孔 | 12 孔可移除腔室载玻片使用?
  
  可以与免疫荧光腔室载玻片一起使用。但是请记住,ibidi 封片剂是非干燥的,因此不会将盖玻片粘在载玻片上。
  
  4.使用免疫荧光3 孔 | 8 孔 | 12 孔可移除腔室载玻片推荐哪种封片剂?
  
  所有常见的亲水性和疏水性封片剂均可用于ibidi免疫荧光室载玻片。为玻璃载玻片爬片,建议使用硬化的永jiu封片剂,例如 Fluoroshield™ (Sigma-Aldrich)、Vectashield® (Vector Laboratories, Inc.) 或 ProLong® Antifade (Thermo Fisher Scientific)。始终确保所选产品适合您的染色技术。
  
  请注意:不建议将 ibidi 封片剂用于免疫荧光腔室载玻片,因它不会硬化,保持液态。
  
  
  5.使用 ibidi 实验室器皿时,哪种封片剂最适合免疫荧光实验?
  
  我们推荐使用 ibidi 封片剂,这是一种基于甘油的封固液,在使用 ibidi µ-Slides、µ-Dishes、µ-Plates 时,针对贴壁细胞或组织切片的免疫荧光染色进行了优化。ibidi 封片剂是一种即用型溶液,其中含有一种抑制剂,可延缓荧光染料的光漂白。
  
  
  
  6.µ-Slide 2 Well Ph+ 和 µ-Slide 4 Well Ph+ 中的“Ph+”代表什么?
  
  Ph代表相衬。µ-Slide 2 Well 和 µ-Slide 4 Well 的 Ph+ 版本专为相差显微镜设计。使用 Ph+ 版本将减少弯月面效应,确保在整个孔中都能获得出色的相差显微成像。
  
  7.如何正确填充 µ-Slide 2 Well Ph+ 或 µ-Slide 4 Well Ph+?
  
  使用标准移液器可以轻松填充 Ph+载玻片。孔边缘附近的特殊开口易于接触孔中的液体。可以在不产生气泡的情况下进行填充和介质交换。由于几何形状,当使用正确的孔体积时,气泡不会被捕获。更多详情请参见产品说明说。
  
  
  8.可粘性载玻片可以从其固定基片上分离吗?
  
  所有可粘性载玻片都形成紧密的密封,不易被机械力破坏。要将载玻片与其安装件分离,可以使用丙酮(例如,将载玻片浸入丙酮烧杯中)。但是请记住,丙酮可能与其表面或基材不相容。
  
  9.为什么我的 ibidi sticky-Slide 会漏液?
  
  与标准载玻片(厚度为 0.8 - 1 mm)相比,ibidi 粘性载玻片更适用于柔性基材,例如聚合物或玻璃盖玻片(厚度为 160 - 190 µm)。基材越坚硬,贴上粘性载玻片后产生的张力就越大。因此,在组装载玻片时要格外小心,以防止其泄漏,这一点非常重要。
  
  以下是一些防止漏液的提示:
  
  • 使用夹子或 ibidi Clamp for Sticky-Slides(#80040 + 相应的适配器)将两个部分压在一起。
  
  • 增加将载玻片压到基材上的时间。
  
  • 使用前,让组装好的载玻片在 20°-40°C 的温度下放置过夜。
  
  如果这些提示都不能解决问题,请联系 ibidi 技术支持。
2022-04-21 17:50:51 228 0
免疫荧光应用-巨噬细胞在ibidi腔室载玻片,通道载玻片中的培养处理

  1. 基本信息

  

  下面的应用描述了小鼠巨噬细胞系RAW-264.7(生物安全等级2)在ibidi µ-Slides VI 0.4 和8孔腔室载玻片的培养方案。这是一个特殊的细胞系的例子,用于显示粘附时间,细胞密度和细胞形态的示范。本应用可根据您的具体实验要求进行调整。

  

  2. 材料

  

  在设置中应用下列材料:

  

  ·RAW-264.7 (murine macrophages, CLS - Cell Lines Service, Biosafety Level 2) 

  

  ·Medium: RPMI 1640 with 2 mM L-Glutamin and 10% FBS 

  

  ·µ-Slide VI 0.4, ibiTreat (ibidi 80606)

  

  ·µ-Slide 8 well, ibiTreat (ibidi 80826)

  

  ·Accutase (PAA Laboratories GmbH) 

  

  ·1x Phosphate buffered saline (PBS) 

  

  3. 细胞培养与材料制备

  

  在将细胞接种到玻片中之前,按照常规的方法培养细胞。

  

  µ-Slide VI 0.4 :通道玻片和培养基,在37℃和5%CO2培养箱中培养过夜。这对于避免随着时间的推移出现气泡至关重要。为此,在50 ml器中填充适量的培养基,并轻轻地将瓶盖拧紧。在 µ-Slide 8孔载玻片开放孔井中,气泡可排出到大气中。

  

  拆开µ-Slide的包装,把它放在µ-Slide支架上,并在准备细胞悬浮液时同时将盖子放在 Luer 适配器/孔上。

  

  4. 播种细胞

  

  分离细胞:

  

  吸出培养瓶中的培养基,并用PBS洗涤细胞一次。每75cm² 烧瓶中加入3-5 ml的Accutase,并将烧瓶放入培养箱中以加快分离速度。如果是RAW-264.7细胞系,则大约需要8分钟。使用Accutase分离的细胞存活率更高。

  4.1. 将细胞接种到µ-Slide VI 0.4中

  

  在µ-Slide VI 0.4建议的细胞浓度:最终细胞数  0.3 x 10 5 cells/cm²,制备浓度6 x 10 5cells/ml。通过将移液器尖端直接放在通道的入口上,将30 µl细胞悬浮液填充到每个通道中。将盖子盖在玻片上,在37°C和5%CO2下孵育半小时以固定细胞。

  

  细胞贴壁后,分别用60 µl无细胞培养基填充储液池。 避免将移液器吸头直接指向通道的入口。将玻片放回培养箱中。

  图1:接种后一小时,在ibiTreat µ-Slide VI 0.4(货号80606)中的RAW-264.7

  图2: 在ibiTreat µ-Slide VI 0.4中的RAW-264.7,孵育24小时后

  图3:在ibiTreat µ-Slide VI0.4中的RAW-264.7,培养四天后

  

  4.2 将细胞播种在µ-Slide 8 well 中

  在µ-Slide 8 well建议的细胞浓度:最终细胞数 0.3 x 10 5 cells/cm² ,制备浓度 1.1 x 10 5 cells/ml。将300 µl 的细胞悬浮液注入各孔中。将盖子盖在玻片上,在37°C和5% CO2中孵育。不需要进一步添加培养基。

  图4:在ibiTreat µ-Slide 8 well(货号:80826)中的RAW-264.7,播种后1小时

  图5: 在ibiTreat µ-Slide 8 well中的RAW-264.7,孵育24小时后

  图6:在ibiTreat µ-Slide 8 well中的RAW-264.7,经过四天的培养

  

  为获得最佳的分布的匀的细胞,我们建议使用像µ-Slide VI 0.4 这样的通道载玻片。在8孔腔室载玻片中,细胞密度可能会在孔的整个表面上因点而异,具体取决于细胞播种过程中的处理。

  

  5. 免疫荧光染色

  

  像往常一样为您的细胞固定和染色。

  

  注意:在 µ-Slides 中染色时注意液体的处理

  

  µ-Slide VI 0.4 :更换液体,先吸出两个储液池而不排空通道。 如果您使用的是真空设备,请注意不要将吸头直接放在通道的入口上。 用100 µl新溶液冲洗通道3次。 从一侧添加新的溶液,通过通道流入另一个储液池,然后从另一侧吸出,直到两个储液池都排空。注意通道永远不要干涸!

  

  µ-Slide 8孔载玻片:在 µ-Slide 8孔中,无需特殊处理措施。像在任何其他培养皿或孔板中一样的交换液体。

  

  下文中,给出了使用以下材料对细胞核和肌动蛋白丝进行染色的示例:

  

  细胞核:DAPI(Diamidino pheylindol dihydrochlorid) SIGMA, 32670 

  

  肌动蛋白丝:Phalloidin, Alexa Fluor ® 488 Conjugate, LONZA, PA-3010 

  

  1. 用3.7% 的PFA在PBS(pH 7.4)中室温下固定细胞10分钟。

  

  2. 用PBS清洗细胞三次。

  

  3. 用Triton X 100(0.1%)孵育细胞5分钟。

  

  4. 用PBS清洗细胞三次。

  

  5. 用1%牛血清白蛋白在PBS中孵育20分钟。

  

  6. 用PBS清洗细胞三次。

  

  7. 在0.2μm浓度下用鬼笔环肽Alexa For 488孵育细胞20分钟。

  

  8. 用PBS清洗细胞三次。

  

  9. 用DAPI(0.5μg/ml)孵育细胞10分钟。

  

  10. 用PBS清洗细胞三次。

  

  11. 完全吸出通道并用ibidi封片剂重新填充。 现在样品可在显微镜上观察了。保存在阴暗阴凉处可储存数周。

  图7:在 µ-Slide VI 0.4中的RAW-264.7用DAPI(细胞核、蓝色)和Phalloidin, Alexa Fluor ® 488 Conjugate(肌动蛋白丝,绿色)

2022-08-23 16:10:37 291 0
ibidi科普知识系列|血管生成实验小常识

  1、哪种细胞密度最适合我的实验?

  

  通常,我们建议每孔使用5,000-10,000个HUVEC。 但是,确定最佳细胞数对于使用µ-Slide血管生成从管形成测定中获得最佳结果是至关重要。 细胞密度取决于细胞类型和细胞大小。 因此,在开始实际实验之前,我们建议在非抑制条件下播种几个细胞数并对管形成进行成像。 然后,对于最佳测定条件,使用在您的实验中产生最多管数的细胞密度。请记住,细胞通常不会在凝胶基质上增殖。请参阅:血管生成实验实验装置优化和数据分析 |ibidi µ-Slide

  

  2、应该在哪个时间段内观察细胞?

  

  管形成的持续时间取决于细胞类型和所使用的细胞外基质,应单独确定。 通常,HUVEC在 2-4小时后已经形成管。24小时后细胞开始发生凋亡,这导致从基质中脱离和管破裂。请参阅:血管生成实验实验装置优化和数据分析 |ibidi µ-Slide

  

  3、是否需要活细胞成像装置来每小时拍摄管形成测定的照片?

  

  非必须,通过显微镜对 µ-Slide 血管生成上的同一位置进行一致和精确的成像。 可以使用显示 x/y 坐标的显微镜载物台或自动载物台来完成成像。 使用自动化平台,可以将孔的所有位置(特别是每个孔的中心)保存到位置列表中,您可以在每个时间点访问相应的位置。

  

  但是,使用完整的活细胞成像设置在显微镜上建立生理条件要方便得多。使用ibidi Stage Top 孵育系统等活细胞孵育装置有助于在成像过程中提供稳定温度和湿度条件,从而在体外可以直接进行视频拍摄。

  

  4、是否可以使用 µ-Slide 血管生成在凝胶基质内培养细胞?

  

  可以,µ-Slide 血管生成非常适合在精确定义的3D基质中培养细胞。由于大界面的凝胶和顶部细胞培养基,凝胶中的条件可以通过更换上部储液器中的介质来调整。

  

  5、应该在管形成实验中使用含酚红的凝胶还是不含酚红的凝胶?

  

  对于使用µ-Slide血管生成的管形成测定中的相差显微镜,酚红不会干扰图片,并且由于其颜色,处理更容易。然而,当使用荧光显微镜时,酚红可能会干扰探头的波长。在这种情况下,应该使用无酚红凝胶。

  

  6、是否需要将µ-Slide Angiogenesis血管生成载玻片放入培养箱的湿室中进行凝胶聚合?

  我们建议将µ-Slide血管生成载玻片放入加湿腔中进行凝胶聚合。 虽然反应室对于聚合本身不是必需的,但它可以最大限度地减少蒸发的影响。 在高流量孵化器中,防止蒸发的足够百分比的湿度可能不会始终保持一致。 µ-Slide血管生成中的少量凝胶会很快变干,这会导致弯液面的形成。

  

  7、胎牛血清 (FBS) / 胎牛血清 (FCS) 浓度是否会影响管形成实验中的管形成和降解速率?

  

  一般是的。 这取决于所使用的细胞类型或细胞系。 当提供浓度高达 10% FCS 的细胞培养基时,我们在 µ-Slide 血管生成中观察到典型的原代细胞 (HUVEC) 管形成和 Matrigel® 上的几种内皮细胞系。 但是,我们建议分别优化每个细胞系的 FBS/FCS 浓度。

  

  8、您是否推荐使用减少生长因子的 Matrigel® 进行管形成分析?

  对于使用µ-Slide血管生成的管形成测定,我们使用了减少生长因子的 Matrigel® 和未减少的 Matrigel®。请参阅:肿瘤学必备 | 血管生成实验介绍

  

  9、我们希望使用减少了生长因子的 Matrigel® 和无血清培养基以及 50 ng/ml VEGF。 这足以刺激管的形成吗?

  

  可以,这种组合足以刺激ibidi血管生成实验室器皿中的管形成,而培养基中没有任何额外的生长因子。

  

  10、除了 Matrigel® 之外,您在试管形成实验中是否有使用其他凝胶的经验?

  

  原则上,任何凝胶都可用于µ-Slide血管生成管形成实验。 细胞可以附着在表面上是很重要的。 胶原蛋白、纤连蛋白和层粘连蛋白为细胞粘附提供了重要的结合基序。

  

  11、什么是管形成实验合适的阳性和阴性对照?

  

  建议使用阳性和阴性对照来减少管形成实验中的变量。阳性对照是预期细胞在其中形成血管的样本(取决于实验设置),从而向研究人员表明该实验已正确进行。阴性对照是与所有其他样品以相同方式处理的样品,但预计不会显示任何实验结果(例如,很少或没有管形成)。

  

  ibidi血管生成实验室器皿中管形成实验的最佳阳性和阴性对照很大程度上取决于所使用的细胞、凝胶基质和一般实验设置。因此,我们建议您查阅文献,了解您感兴趣的主题中成功使用的对照(阳性和阴性对照)。

  

  在下文中,您可以找到管形成测定中阳性和阴性对照的可能方法:

  

  如果需要分析特定化合物诱导血管生成的效力,则可以使用用已知血管生成诱导剂(例如 VEGF 或 FGF2)处理的样品作为阳性对照。浓度很大程度上取决于细胞类型和实验设置。

  

  如果使用原代细胞,预筛选的内皮细胞系(例如,HUVEC)在用特定生长因子处理后表现出明确的反应,可以作为阳性对照。

  

  对于某些细胞类型,形成管的能力还取决于所使用的凝胶基质。作为阳性对照,内皮细胞应在含有饥饿培养基(不含生长因子或血清的培养基)的生长因子减少的 Matrigel®上显示管形成。如果需要测试促血管生成物质,则使用饥饿培养基尤其重要,因为大多数细胞培养基都添加了生长因子。为了分析物质的真实效果,基质和培养基都必须不含任何生长因子。作为阴性对照,细胞可以播种在不同的基质(例如胶原蛋白 I)上,预计不会形成管状。

  

  不影响细胞活力的管形成抑制剂(例如,苏拉明或萝卜硫素)可用作阴性对照。如果实验的目的是测试抗血管生成物质,则使用这种类型的抑制剂尤其重要。

  

  如果用任何溶解的物质(例如,在 DMSO 或乙醇中)处理细胞,则仅使用溶剂作为阴性对照。

  

  12、是否有用于分析管形成实验的推荐染色方案?

  一般来说,相差显微镜足以自动分析 µ-Slide血管生成中的标准管形成实验。 但是,如果您想研究某种标记,您可以应用您的标准方案(例如,用于免疫荧光染色),但要小心,以免损坏凝胶基质或细胞网络。

  

  使用calcein的染色方案示例可参阅:肿瘤学必备 | 血管生成实验介绍

  

  13、在开始实验之前,我是否必须将 ibidi 血管生成实验室器皿平衡到 37°C?

  

  不,不需要平衡 µ-Slide 血管生成。 在室温下储存,可以立即用凝胶基质填充。 由于µ-Slide 的开孔形式,加热时从凝胶中逸出的气体可以与大气自由交换。

  

  14、完成实验后,µ-Slide Angiogenesis和µ-Plate Angiogenesis 96 Well可以重复使用吗?

  

  不可以,µ-Slide血管生成载玻片和µ-Plate血管生成96孔板是一次性耗材,仅供一次性使用。

  

  15、µ-Slide 血管生成是否有96孔版的?

  有。 µ-Plate血管生成96孔板具有与µ-Slide血管生成相同的“孔中孔”设计和凝胶体积 (10 µl)。 µ-Plate血管生成96孔可用作高通量管形成实验的筛选板,具有完全的ANSI/SLAS (SBS) 和robotics兼容性。


2022-06-23 14:13:21 937 0
细胞爬片免疫荧光实验有人做过吗?
 
2016-09-06 08:26:44 329 2
吉时利万用表DMM7510应用指南

吉时利万用表DMM7510 集高精度、高分辨率数字万用表 (DMM)、图形触摸屏显示器和高速、高分辨率数字化器于一身,是diyi款图形采样万用表。 其具有 pA 灵敏度和 1M 个样点/秒的采样率,能准确测量超低睡眠模式电流和传输无线设备的漏电流。

一、7510高性能万用表的主要特点及优势:

二、7510高性能万用表应用

应用1:瞬态小电流

物联网模块、低功耗器件、低功耗IC电流分析

优势:

1、测量精度高,7 ½测量,100pA精度

2、采样率高:1MS/s,实时性强

3、长时间记录数据:大于24小时

4、图形观察,数据记录,数据统计

5、CCDF结果

6、性价比高

应用2:电压稳定性测量

电池OCV的电压稳定测量,广泛应用于电池生产流程的电压参数阶段。

目前,电池厂家以及提供电池充放电设备的厂家,普遍把电池电压的精度定为1mV,哪种万用表能满足标定这样的要求呢?上图对比了6½和7½数字万用表测量18650电池的结果,明显看出,7½才是Z佳选择,DMM7510是满足行业要求的高精度数字表。

应用3:电压、温度测量

电池EOL下线检测

DMM7510不仅能高精度测量电压值,也可以测量温度,在电池行业,无论是实验室验证电芯,还是电池EOL,都可以把7510万用表集成到系统中,一台仪器满足电压和温度的高精度要求。

应用4:类似应用

如果要测量3.8958V电压,精度要求达到0.1mV,你必须选择 7½万用表。

西安安泰测试作为泰克吉时利的长期合作伙伴,为西安多所院校、企业和研究所提供泰克吉时利产品现场演示,并获得客户的高度认可,安泰测试将和泰克吉时利厂家一起,为客户提供更优质的服务和全面的测试方案,为客户解忧。

2020-05-27 14:59:18 362 0
ibidi科普知识系列|伤口愈合细胞迁移实验小常识

1、Culture-Inserts插件可以重复使用吗?


尽管 Culture-Inserts 插件中的材料可高压灭菌并且与酒精相容,但我们不建议重复使用。 如果您仍想尝试重复使用,则需要建立一个用酸或碱的清洁程序。 ibidi没有任何清洁Culture-Inserts插件的经验,虽然它们可能会保持粘性,但之前实验的残留可能会影响重现性。 


2、可否在盖玻片上使用 Culture-Inserts插件吗?


可以,您可以在任何盖玻片上使用 Culture-Inserts插件。 到目前为止,还没被报告与任何干燥表面不相容。 


3、是否可以使用 Culture-Insert 插件制作小于 500 µm 的伤口?

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不可以,Culture-Inserts 插件中最小和标准的伤口尺寸是 500 µm。 Culture-Insert 4 Well /4孔插件会有一个额外的中心间隙,伤口大小为 1000 µm。

3的图片


4、Culture-Insert 插件是如何固定在培养皿上的?


Culture-Insert 插件由生物相容的硅胶材料制成。 硅胶底部有一个粘性表面,可粘附(粘)在任何平坦、干燥、均匀的表面。 这种材料足够柔软可粘到表面上。 您可以用无菌镊子按压插件来简单地修复它。

4的图片


 5、您是否曾经遇到过 Culture-Inserts 插件无法粘附在定制涂层表面上的问题?


只要表面干燥,我们从未遇到过让 Culture-Inserts 插件粘附在定制涂层表面上的任何问题。 但是,潮湿的表面会导致泄漏。 因此,请确保您的定制涂层表面完全干燥。


6、需要在 Culture-Insert 插件中播种多少个细胞才能进行细胞迁移实验?

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开始迁移实验时,Culture-Insert 插件中的细胞层应融合。 在所有实验中,汇合细胞层的密度应尽可能一致。 使用的接种细胞数量取决于您的细胞类型,因此您可以在 Culture-Insert 2 Well 说明书中找到推荐的范围和详细方案。 


7、为什么移除 ibidi Culture-Insert 插件后细胞有时会从盖玻片上脱落?


以下是解释细胞脱离的一些可能原因:


• 细胞密度太高。 --> 播种更少的细胞(细胞层应在 24 小时后生长至 100% 融合,但不能过度生长)。有关伤口愈合试验的详细方案,请参阅:伤口愈合/细胞划痕实验新方法-如何划出笔直均一的划痕(这是个链接2020-12-10发布的公众号)


• 细胞正在挨饿。 --> 增加每个插入孔的培养基体积,或在细胞生长期间更换培养基。


• 在极少数情况下,细胞类型不能很好地粘附在 ibiTreat 表面。 --> 首先,覆盖盖玻片表面以促进细胞附着。然后,在插入 ibidi Culture-Insert 插件之前让涂层干燥。


以下是使用带有涂层的 ibidi Culture-Inserts 插件以促进细胞粘附的一些额外提示:


• 我们强烈建议提前测试移除ibidi Culture-Insert 插件是否会破坏迁移间隙中的涂层。这可以通过使用针对涂层蛋白的荧光标记抗体进行分析。如果迁移间隙区域中涂层的荧光信号与开放孔中的一样均匀和强烈,则可以假设在插入物移除后是保持完好的。经过几次成功的测试后进行实际实验通常是安全的。


• 如果去除插入物破坏了大部分涂层,则仅涂覆插件的孔,然后接种细胞。取出插件后,通过向培养基中添加低浓度涂层来填充间隙并孵育约 30 分钟。之后,用普通介质替换涂层溶液并继续进行迁移实验。

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8、当 Culture-Insert变干燥时,包被蛋白会失去活性吗?


这主要取决于与 Culture-Insert 插件一起使用的蛋白质类型。 使用层粘连蛋白的人通常更喜欢在涂层和细胞接种之间保持水分。 根据我们的经验,当纤连蛋白和胶原蛋白 IV 干燥时,我们没有发现对细胞迁移速度有任何影响。 


9、有没有办法用悬液细胞进行伤口愈合实验,或者该实验仅适用于贴壁细胞?


目前,使用 Culture-Insert插件的伤口愈合实验只能用于贴壁细胞。 然而,单个细胞的迁移研究可以在 µ-Slide 趋化性中通过将细胞嵌入到3D基质(例如,I 型胶原蛋白凝胶)中进行。 


10、是什么使 Culture-Inserts插件在细胞接种过程中不会泄漏?


Culture-Insert 插件由硅胶材料制成。 上部是粗料,下部是非常柔软的材料,在按下 Culture-Insert 插件后会固定在表面上。 正确插入时是不会有任何泄漏的。 


11、该如何存储 Culture-Inserts插件?


请在室温下储存 Culture-Inserts。 打开过的产品应储存在无菌容器中。 


12、有时很难在 Culture-Insert 插件中看到细胞层的汇合。 您有什么建议?


当使用相差显微镜和小孔时,例如 Culture-Insert 插件或 96 孔板,空气-水界面之间的弯月面会导致表面强烈弯曲。 这会破坏除孔中心以外的任何地方的相位对比效应。


一种解决方案是用细胞培养基完全均匀地填充 Culture-Insert 的两个孔。 通过这样做,您可以在孔上方的介质和空气之间创建一个平面。 请记住,这可能会导致两孔之间的交叉污染。


13、有时,细胞倾向于聚集在 ibidi Culture-Insert插件的边缘。 怎样才能避免这种情况?


当细胞在 Culture-Insert插件中生长到非常高的密度时,会观察到了这种情况。 为了减少细胞团块,您应该在实验开始时使用较低的细胞密度。 然而,有时细胞会粘在与细胞相容的硅胶上。 在这种情况下,我们建议较少孵育时间和/或细胞数量。 


14、Culture-Insert 如何在不造成细胞损伤的情况下模拟生理伤口?

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使用体外实验时,很难以可重复的方式模拟生理伤口。 当然,来自死细胞的碎片可能在与伤口愈合相关的迁移中发挥作用。 使用 Culture-Insert插件的 ibidi 伤口愈合实验提供了可重复的、无损伤的细胞贴片。


在体内,各种其他参数对伤口愈合的影响更大,例如不同细胞类型的相互作用。 使用 Culture-Insert插件的体外 ibidi 伤口愈合实验将迁移速度与所有这些其他影响分开,提供了一个客观且可重复的实验环境。


15、用Culture-Insert插件产生间隙时细胞是否会受损?


Culture-Insert 插件将细胞彼此分离,而不会产生传统意义上的伤口(例如,在划痕实验期间)。 目的是在不产生大量受伤细胞的情况下产生间隙,然后研究间隙闭合。该技术使用户能够将细胞的迁移行为与细胞损伤区分开来。 


16、 Culture-Inserts 插件能否用于蛋白质涂层表面? 拔出 Culture-Insert 插件会干扰涂层吗?


一般来说,只要涂层干燥,Culture-Insert 产检可以放置在涂层表面上。 请注意,插件不会黏附在潮湿的表面上。


但是,我们强烈建议您提前测试插件移除是否会破坏迁移间隙中的涂层。 您可以使用针对涂层蛋白的荧光标记抗体来分析这一点。 如果迁移间隙区域的涂层发出的荧光信号与开放孔中的一样均匀和强烈,那么您可以假设在移除插件后涂层是保持完好的。 经过几次成功的测试后进行实际实验通常是安全的。

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2022-05-25 17:20:25 252 0
ibidi实验方案|在流体环境下细胞培养进行粘附实验

  该应用描述了一种在流动下的粘附试验,该试验旨在研究特定细胞表面分子的作用,以确定它们在细胞附着和粘附到其他细胞类型期间的潜在相互作用。

 

  对于我们的方法,我们使用预染色的鼠肿瘤细胞(多发性骨s瘤:MM)和鼠内皮细胞(EC),然后使用单克隆抗体阻断我们感兴趣的分子之一。简而言之,将EC接种到ibidi通道μ-SlidesI0.6mmLuer中,并在恒流下培养24小时。为了开始共培养,将标记的MM细胞添加到流动容器中并继续流动。24小时后,用抗体(以阻断感兴趣的分子)或相应的同种型对照处理装置,并保持流动24小时。第二天,将μ-Slides与流体单元(FU)断开并清洗以去除非粘附的MM细胞。为了分析标记的MM细胞对EC的粘附,使用共聚焦显微镜获得了μ-Slides的荧光图像。

 

  1. 材料和试剂

 

  •MOPC多发性骨s瘤(MM)细胞系(ATCC,TIB-23™)

 

  •EOMA内皮细胞(EC)系(ATCC,CRL-2586™)

 

  •含10%FCS的RPMI培养基(FisherScientific,11530586)

 

  •内皮细胞生长培养基(EC培养基、CellBiologics、M1168)

 

  •PBS(泛生物技术,P04-361000)

 

  •非酶细胞解离溶液(Sigma-Aldrich,C5914-100ML)

 

  •台盼蓝溶液(Sigma-Aldrich,93595)

 

  •CellTracker™绿色CMFDA染料(ThermoFisher,C7025)

 

  2. 设备和设置

 

 

  •带有2个流体单元(FU)的ibidi泵系统,每个单元都带有用于2ml储液罐的支架(ibidi,10977)

 

  •ibidiμ-SlideI0.6mmLuer,ibiTreat(ibidi,80186)

 

  •ibidiPerfusionSet蓝色,15厘米,内径0.8毫米(ibidi,10961)

 

  •ibidi过滤器/储液罐套装,2毫升(ibidi,10972)

 

  •带细胞培养设备的层流罩

 

  •培养箱(所有培养步骤均在37°C和5%CO2下进行)

 

  •带有适当滤光片组和照相机的荧光显微镜

 

  •粘度:0.0072(dynxs)/cm²

 

  3.实验流程

 

  1.准备EOMA细胞稀释液:根据制造商的说明,使用非酶细胞解离溶液分离先前培养的EOMA细胞。使用血细胞计数器(Neubauerchamber)对细胞进行计数。在EC培养基中将细胞稀释至1.2x106个细胞/ml的浓度。

 

  2.种入EOMA细胞:在3个 µ-SlidesI0.6mmLuer(ibidi,80186)中加入150µlEOMA细胞稀释液(每个µ-Slide1.75x105EOMA细胞),然后孵育3小时。

 

 

表1:实验设置

 

  3.启动流量:播种三小时后,将2个µ-Slides连接到流体单元FU,使用总量2.7毫升EC培养基。在8.2mbar的压力下将EOMA细胞表面的剪切应力设置为0.5dyn/cm²。测量流速并使用两个FU的平均值来计算校准因子。提前孵育FU和连接的载玻片过夜。第三个带有EOMA细胞的µ-Slide用作静态控制。在没有任何流动的情况下孵育它过夜。

 

  4.准备MM细胞:根据制造商的方案,用CellTrackerGreen(CMFDA)染料在600µlRPMI培养基(不含FCS)中染色6x105MM细胞。标记后,离心细胞并使用血细胞计数器对其进行计数。

 

  5.开始与MM细胞共培养:停止流动并在无菌条件下从FU水库中取出EC培养基。要开始共培养,将RPMI培养基(含10%FCS)和EC培养基以1:1的比例混合,并填充该混合物总体积为2.5ml,其中含有1.5x105MM注入两个FU储液罐。将FU重新连接到泵系统并继续流动24小时。

 

  6.分子阻断:将MM细胞添加到ECs后24小时,用100µg/ml抗体(载玻片 #2)或相应的同种型对照(载玻片 #1)处理细胞,将它们直接添加到FU,无需更换介质。将孵育保持在流动状态下24小时。

 

  7.清洗和成像:从FU上断开µ-Slides。用PBS清洗细胞一次,以去除任何非贴壁细胞。使用共聚焦显微镜获取荧光图像,以可视化附着在EC层上的标记MM细胞。

 

 

图1:与同种型对照处理(左图)相比,阻断特定表面分子(右图)时,MM细胞对ECs的粘附性降低


2022-06-29 15:59:20 232 0
ibidi|流体剪切力实验|通道载玻片串连方法步骤

  1.介绍

  

  本应用逐步说明了如何串联连接多个Luer-Slides。优点是仅使用一个流体单元即可观察和培养多个载玻片。当使用相同规格的载玻片时,载玻片中的流速是相同的。也可以通过连接不同高度的载玻片来改变剪切速率(例如,µ-Slide I0.2Luer和µ-Slide I0.4Luer)。

  

  本次介绍了两个载玻片连接的过程。但是它可以应用于大量的载玻片。

  

  2.材料

  

  载玻片:2片 µ-Slides I 0.6Luer, ibiTreat                ibidi (80186)

  

  细胞:Endothelial cells (2.5 · 105 per slide)          e.g. Promocell

  

  培养基:Endothelial Cell Growth Medium            e.g. Promocell

  

  连接器:Serial Connector                                      ibidi (10830)

  

  注射器:带简单Luer适配器的无菌注射器(5 ml)

  

  串行连接器:

  

  管道:Silicone Tubing 1.6 mm ID                           ibidi (10842)

  

  适配器:Luer Connector Male                                 ibidi (10824)

  

  将一个塑料连接器插入通道载玻片的两端(6厘米),以在载玻片之间连接起来。下图是在两端带有两个配套的Luer公接头的连接器管。可用乙醇或高压灭菌消毒接头。

  

  

必须在无菌条件下执行以下步骤!

  

  3. 播种细胞

  

  · 准备1.67 · 106 cells/ml.的细胞悬液。

  

  · 将150 µl注入通道。仅填充通道体积(图1a)。

  

  · 将帽盖在Luer接头上,并将载玻片放在培养箱中培养半小时来固定细胞。

  

  · 细胞固定后,将两边储液接口各加60 µl充满。

  

  4. 连接载玻片

  

  现在准备载玻片,使细胞在通道中生长,并向储液池中填充60 µl无细胞培养基(请参见第3节)。

  

  · 在连接之前,将所有储液器各加60 µl(图1b)。

  

  · 将连接器管的一个Luer适配器插入载玻片的一个母Luer适配器中(图1c)。

  

  · 将一些预备的培养基吸入注射器。倒转注射器并将多余的空气推出(图1d)。

  

  · 使用没有气泡的注射器在载玻片端口注入。可能会有些溢出(图1e)。

  

  小心地将液体注入载玻片,直到连接器管中充满为止(图1f)

  

  

  图1:(a)接种细胞时的用量; (b)载玻片在连接之前已完全填满; (c)载玻片中插入连接管; (d)无气泡的注射器; (e)将注射器插入载玻片一端; (f)用注射器推动介质来填充连接器管道

  

  · 当连接器管道完全充满时(图2a),将其插入第二张载玻片的接口上(图2b-d)。

  

  · 如果要连接两个以上的载玻片,将第二个连接器管放在第二个载玻片空的另一端口上,用注射器推入介质,依此类推。

  

  · 慢慢连接的所有载玻片将注射器从适配器上卸下(图2e)。

  

  · 要将载玻片连接到灌注套件,两个Luer容器必须在顶部填充培养基。可用纸巾擦去过多的培养基。

  

  

  图2:(a)连接管已完全充满; (b-c)将连接器管插入第二载玻片的鲁尔接头上; (d)带有适配接头管连接; (e)取下注射器; (f)擦去溢出的介质,并填充储液罐以连接到灌注套件。

  

  5. 连接到灌注装置

  

  将载玻片连接到灌注套件

  图片串联安装带有两个µ-Slides I Luer的一个流体单元

2022-07-15 17:39:29 274 0
ibidi实验方案|肿瘤细胞2D侵袭检测方案

AnielloFederico*,JochenUtikalSkinCancerUnit,GermanCancerResearchCenter(DKFZ),69120Heidelberg,Germany.*Correspondingauthor.E-mailaddress:a.federico@dkfz-heidelberg.de


为了研究肿瘤微环境影响下肿瘤细胞的运动性和侵袭特性,建立了体外2D侵袭方案。这种2D侵袭方案是一种共培养试验,在这种情况下,是由肿瘤和基质细胞(例如成纤维细胞)组成的。一旦两种细胞类型接触,在不同的条件下评估侵袭成纤维细胞单层的肿瘤细胞的数量,在我们的研究中,我们在模拟实体肿瘤微环境中发现的条件,例如与基质细胞(成纤维细胞)的相互作用以及成纤维细胞释放的可溶性因子(Nnetu等,2012)。我们使用A375黑色素瘤细胞系和真pi成纤维细胞进行了此测定。黑色素瘤细胞激活成纤维细胞,继而维持肿瘤细胞的生长,恶性转化和耐药性(Flach等,2011)。然而,在刺激所测试的抗ai化合物后,我们发现与成纤维细胞直接接触的黑素瘤细胞显示出运动能力受损并且未能侵袭成纤维细胞层。


材料和试剂

1. GFP-A375细胞系(ATCC)

2. 番茄皮成纤维细胞(从健康患者中分离)

3. MEF细胞培养基

4.PBS(Sigma-Aldrich;D8537)

5.胰蛋白酶-EDTA溶液(Sigma-Aldrich;T3924)

6. 台盼蓝溶液(Sigma-Aldrich;93595)

7.DMSO(CarlRoth;A994.2),在0.1%最终浓度下使用

8.MithramycinA(BioTrend;10-2085-5mg),在300nm浓度下使用,用DMSO稀释

仪器设备

1. 层流净化罩

2. 12/24孔多孔板(GreinerBio-One)

3. 台式离心机

4. 细胞计数器

5. 2孔插件(ibidi: 80209)/预置2孔插件培养皿(ibidi:81176)

6.细胞培养管

7. 涡旋

8. 镊子

9. 光学显微镜

10. 荧光显微镜

11. NIS-Elements软件

ibidi:81176

实验流程

01. 将GFP-A375和番茄成纤维细胞系稳定地保存在MEF培养基中,在37°C和5%C02加湿培养箱中。

02. 当细胞达到亚融合度(约80%融合度)时,在带有PBS的通风橱中清洗它们,以去除死细胞和碎片。

03. 在培养箱中用胰蛋白酶-EDTA溶液胰蛋白酶消化细胞约5分钟,然后添加MEF培养基以阻止反应。

04. 将细胞悬浮液收集在15ml细胞培养管中,并用台式离心机(1500xg,5´,RT)短暂离心。

05. 将细胞重新悬浮在新鲜培养基中;将一体积的细胞悬液与另一体积的台盼蓝溶液混合,用细胞计数器计数活细胞。

06. 在MEF缓冲液中以4x105细胞/ml的浓度稀释细胞。

07. 在多孔板上,在每个孔的中间放置一个Culture-Insert2孔(2孔培养插件)。

08. 用75µl(3x104细胞)FP-A375细胞填充插入物一侧,并用番茄成纤维细胞填充另一侧。用移液器上下混合插入物中的细胞,以确保细胞完全分布。

09. 将多孔板放在培养箱中,放置过夜。

10. 第二天,在镊子的帮助下,小心地从每孔中取出培养基和插件,并用PBS清洗。

11. 小心除去PBS,然后加入新鲜的MEF培养基。

12. 用光学显微镜检查GPF-A375与Tomto成纤维细胞之间产生的间隙的闭合状态。

13. 一旦每个孔中的间隙完全闭合,请使用荧光显微镜和成像软件获取荧光图像。确保肿瘤细胞尚未侵入成纤维细胞单层。

14. 小心地除去培养基,并在控制组孔中添加培养基+0.1%PBS,在处理组孔中添加培养基+300nM丝裂霉素A。将板放在培养箱中24小时(处理孵育时间)。

24小时后,在荧光显微镜下重新采集共培养孔,以评估治疗组与对照组(绿色荧光细胞散布在红色标记层上)的肿瘤细胞侵袭行为的任何变化(图2)。

图1:2D侵袭系统的示意图

图2:2D侵袭检测的荧光图像

将黑素瘤细胞和成纤维细胞共培养,然后暴露于300nmMithramycinA(或DMSO)。24小时后,评估侵袭成纤维细胞层的肿瘤细胞的数目。A375细胞显示出大规模的侵袭行为,受到MithramycinA治疗的损害。比例尺:500μm。

备注:

1.此处描述了MEF培养基组成(参考文献1)。

2.此文仅供参考。

3.此实验方案来自ibidi的实际用户,更多详情可联系本文作者。

参考文献:

1.MithramycinAandmithralogEC-8042inhibitSETDB1expressionanditsoncogenicactivityinmalignantmelanoma. FedericoA,SteinfassT,LarribèreL,NovakD,MorísF,NúñezLE,UmanskyV,UtikalJ.MolelucarTherapy-Oncolytics2020;doi: https://doi.org/10.1016/j.omto.2020.06.001 (Methoddescribedinthisprotocolwasincludedinthispublishedarticle).

2.Theimpactofjammingonboundariesofcollectivelymovingweak-interactingcells. NnetuKD,KnorrM,KäsJ,ZinkM.NewJournalofPhysics2012;doi:https://doi.org/10.1088%2F1367-2630%2F14%2F11%2F115012

3.Fibroblastscontributetomelanomatumorgrowthanddrugresistance. FlachEH,RebeccaVW,HerlynM,SmalleyKS,AndersonAR.Molecular pharmaceutics2011;doi:10.1021/mp200421k

2022-08-09 15:01:18 186 0
DAQ6510数采/开关系统应用指南

近期,很多用户咨询吉时利数采2700,但2700已经停产,吉时利推出的DAQ6510 数据采集和记录万用表系统 具有触摸屏用户界面,可在仪器上更快完成设置、实时监控测试状态以及分析详细数据,从而实现前所未有的简单性,今天安泰测试就带大家全面了解一下DAQ6510的主要特点和应用:

一、DAQ6510数采/开关系统的主要特点及优势

二、DAQ6510数采/开关系统典型应用

应用1:温度测量

轻松进行环境测试和加速的使用寿命测试

泰克的特点和优势:是少于80CH的,可以使用触摸屏显示器快速设置有统计意义的设备数量的测试。在测试过程中监视测试状态。在触摸屏上查看图形或表格形式的数据。

也可以使用KICKSTART软件来电脑控制记录和显示。并存储大量的数据。

应用2:小电阻测量

经济GX地测试低值电阻组件

使用 DAQ6510 准确、可靠地测试电缆、低值电阻和连接器等组件

应用3:多参数测量,电压/温度

增强测试能力并提高吞吐量

使用 DAQ6510 可以增加单个测试系统的设备数量,并zui大限度提高测试能力。利用 DAQ6510 缩短测量时间和加快扫描速率。

应用4:电池PACK参数测量

新能源的发展,使电池的产量越来越大,评估电池的电压、温度等参数越来越多

应用5:配套其它仪器做更多参数测量

DAQ6510可以配合内阻表或者SMU源表对有源器件如LD、LED等进行综合参数测量。

如果大家有以上应用,不妨可以了解一下DAQ6510,如需了解DAQ6510更多产品信息,欢迎访问安泰测试网。

2021-04-13 11:42:10 370 0
LED荧光显微镜在间接免疫荧光中的应用

      高品质的荧光显微镜是临床实验室完成间接免疫荧光检测的必备实验条件。目前,大部分临床实验室的荧光显微镜还是采用传统的汞灯作为光源。为了提高临床检验的工作效率、改善检测环境,广州明美推出了一整套的LED荧光显微镜和显微成像系统解决方案。该解决方案包括LED荧光显微镜和显微成像系统。

相对于传统汞灯光源, LED光源具有的优势
1.特定的LED光源发射特定波长的激发光,能够更有效的激发样品;非紫外LED不存在紫外辐射,高度确保使用者的安全。
2.超长的使用寿命(50,000小时),是传统汞灯的250倍,极大地延长了显微镜寿命、降低实验成本;且在寿命内输出强度、波长稳定,确保激发的有效性。
3.实时开关,不需要预热、冷却。独特的LED系统,纳米级的响应时间,打开电源开关后可以立即达到全功率输出,实时开关不会影响到光源。
4.LED安全性高、冷光源、体积小,可随意搬动,不存在汞泄露污染、发烫问题。
5.使用过程中,无需光路调节。
6.携带亮度调节旋钮,避免过高亮度引起的荧光淬灭。
7.可选配便携式移动电源,随意移动,突然停电也不会影响使用。

MF-LED荧光附件

MF-LED荧光模块的推出,为免疫荧光实验室荧光显微镜解决方案提供了一种可能。借助LED荧光模块,可轻松地将一台无限远光学系统的普通显微镜转化为模块化的、节能GX的、易于操作和超长寿命的荧光显微镜,实现GX的荧光观察。

间接免疫荧光检测用MF-LED的主要参数如下:

LED激发光波长激发滤色片二向色分光镜发射滤色片
460-490nm460-490nm500nm510nm


MSHOT 显微成像系统

间接免疫荧光检测自身抗体时,可观察到各种不同的荧光核型和表现,广州明美为荧光检测/观察提供了专业的显微数码成像系统—MC系列/MD系列。借助这些高分辨率、高清晰度、高像素、高灵敏度的成像系统,可实现实时捕获各种清晰的荧光图像,以做检测结果记录、典型案例讨论、核型判读教学等。

左图:明美MF-B-LED搭配Olympus CX22显微镜主机(含物镜)、明美三档三目分光器件、明美数码相机MC20-N组成的荧光解决方案;右图:该荧光解决方案的拍摄效果图。


(来源:广州市明美光电技术有限公司)

2019-06-18 15:38:13 779 0
ibidi科普小知识:您应了解的实验小常识~
1、ibidi 聚合物和玻璃盖玻片的刚度/杨氏模量是多少?
 
  ibidi 聚合物盖玻片和玻璃盖玻片的杨氏模量分别约为 1 GPa 和 70 GPa。
  
  注:杨氏模量(或弹性模量)描述了固体材料的拉伸弹性。 它本质上是材料的刚度,或者换句话说,材料弯曲或拉伸的难易程度。
  
  2、是否可将ibidi Culture-Inserts/ibidi插件放置在预涂层的表面上?
 

  
  一般来说,只要涂层干燥,ibidi Culture-Inserts/ibidi插件是可以放置在涂层表面上的。 请注意,插件不会粘在潮湿的表面上。
  
  有关更多信息,请关注我们公众号,参阅为什么当移除 ibidi Culture-Insert/ibidi插件时细胞有时会从盖玻片上脱落?(将在后续公众号中推出)
  
  3、ibidi 聚合物盖玻片通常会发生什么水平的气体交换/渗透性? 它们真的允许气体交换吗?
  
  ibidi 聚合物盖玻片确实允许气体交换。 在 23°C 时,O2 的渗透性为 153 cm³/ (m² d bar),CO2 的渗透性为 474 cm³/ (m² d bar)。 这意味着在 1 bar 大气压下,每天 153 cm3 O2 可以穿透 1 m2 的 180 µm (+10/-5 µm) 厚聚合物薄膜。
  
  对于 ibidi Stage Top 孵化系统的缺氧实验,我们建议使用带有玻璃底部的盖玻片 ibidi 载玻片,因为它们不透气。
  
  4、细胞可以在 µ-Slide 18 Well - Flat 中培养多长时间?
  
 
  由于 µ-Slide 18 Well-Flat 的开孔结构和使用的物质量少,蒸发率高。 因此,玻片仅推荐用于不超过 48 小时的短期检测。
  
  5、是否可以在 µ-Slide 2 Well Co-Culture 的小孔中进行独立实验?
  
 
  不可以,因为 µ-Slide 2 Well Co-Culture 的小孔之间很有可能会发生交叉污染。 但是,可以在两个主要孔中进行两个独立的实验。
  
  6、在 µ-Slide 2 Well Co-Culture 中,细胞能否穿过孔之间的屏障板?
  
 
  能, 随着时间的推移,运动细胞可能会在 µ-Slide 2 孔共培养中的屏障上移动或增殖,尤其是当它们以高融合度接种时。 为避免这种情况,在载玻片表面包被可能会有所帮助。
  
  7、µ-Slide III 3in1 可以通过 ibidi 流体剪切力系统进行控制吗?
  
 
  可以。 通过特殊设置,可以使用 ibidi 流体剪切力系统完全控制µ-Slide三合一通道培养载玻片。 以这种方式,可以使用层流将载玻片中的贴壁细胞暴露于交替梯度。 如需了解更多信息请联系我们获得技术支持。
  
  8、如何防止培养液蒸发?
  
  根据孵化条件,少量培养基会迅速蒸发,尤其是在长期实验期间。 此外,所有细胞培养箱都需要很长时间才能恢复湿度,尤其是在打开门之后。 虽然温度和二氧化碳在几分钟内恢复,但完全恢复湿度可能需要几个小时。
  
  由于这些问题,我们建议使用以下技术之一来最大程度地减少蒸发:
  
  将细胞培养容器放入装有湿纸巾的培养皿中。
  
  用封口膜密封培养容器。
  
  使用 ibidi 防蒸发油(例如硅油)。
  
  详细的应用说明可参见细胞共培养的全新实验方案
  
  9、我的 µ-Slides/µ-Dishes 底部有划痕。 这些是从哪里来的,我该如何预防?
 
  
  ibidi 聚合物盖玻片对机械刮擦很敏感。 如果在将 ibidi µ-Slide/µ-Dish 直接放在工作台上或培养箱内时不加倍小心,它可能会受到损害。 因此,在显微镜下可能会看到小划痕。 为避免这种影响,我们建议使用µ-Slide Rack或µ-Dish Rack等保护底部材料。 该解决方案还允许同时方便地处理多达8个µ-Slide或6个µ-Dish。
  
  10、如何最小化µ-Plate 24 孔中的弯液面?
  
 
  弯液面的形成是小型开放孔的固有特性,无法完全避免。
  
  与疏水表面相比,弯液面更容易在亲水表面上形成。由于大多数贴壁细胞类型不能很好地附着在疏水表面上,ibidi 提供具有亲水、组织培养处理表面和最佳细胞粘附特性的培养容器 ( µ-Plate 24 孔黑色 ID 14 mm ibiTreat,#82426)。然而,在这种情况下,弯液面的形成可能比使用未涂层板时更突出。
  
  为了减少弯液面的形成,请尝试使用具有未经处理的疏水表面的 µ-Plate 24 Well Black ID 14 mm Uncoated, Hydrophobic (#82421)。当充满水时,该表面几乎不会形成弯液面。然而,细胞培养基中的蛋白质会附着在孔的表面。一段时间后,这将形成非共价单分子涂层,形成亲水表面和突出的弯月面。水和缓冲液都不能洗掉蛋白质涂层。
  
  为了尽量减少成像过程中的半月板问题并确保细胞附着,您可以在 µ-Plate 24 Well Black ID 14 mm Uncoated, Hydrophobic 中尝试以下方案:
  
   用结合蛋白(例如聚-L-赖氨酸或纤连蛋白)包被孔以支持细胞附着。使用尽可能小的体积以确保只有孔的下部是亲水的(例如,0.5–0.8 ml)。小心处理板,使孔的上部不与蛋白质溶液接触。涂敷后,小心地除去溶液。
  
   将细胞接种到 0.5–0.8 ml 培养基中。定期检查,至少每天一次,看看这个量是否足以确保您的细胞存活。如有必要,更换培养基,不要让孔的上部“湿”。
  
   成像时,用 1.5–2 ml 无蛋白质溶液或缓冲液替换培养基。现在,第一步的亲水涂层应该低于您的填充水平,并且由于孔上部的疏水性,应该只会形成最小的弯液面。
2022-04-26 16:38:07 235 0

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