ELISA为什么所有孔都完全没颜色

全是阴性？

你的试验想检测什么？检测抗原？检测抗体？

你这个实验思路问题很大。
你自己先固定抗体，加样，是不是加抗原？再加二抗，请问，加不加这个样，也就是加不加这个抗原，影响实验结果吗？酶标二抗是和抗体结合的。还有你的二抗和一抗之间中间隔了个抗原，二抗还能和抗体结合吗？

如果你确定是步骤没有问题的话，不显色的因素很多，要一一排除。假如是二抗或者显色液的问题，可以用二抗和显色液混合看是否显色，每个因素逐一排除。我们的ELISA检测抗原或者抗体的步骤是这样的，你可以做个参考：包被好抗体的板条，加入待测样品，孵育后洗涤拍干，加入酶标抗原孵育后洗涤拍干，加入显色液显色。