我做的是转基因整合位点的检测，用的是TAIL-PCR技术，做载体线性化时用的是单酶切，在距离酶切位点300-500bp处的两端我分别设计引物做TAIL-PCR，产物都在1000bp以上，侧序后刨除那300-500bp 后，剩下的碱基就应该是整合在基因组上的序列才对啊，可是还是载体上... 我做的是转基因整合位点的检测，用的是TAIL-PCR技术，做载体线性化时用的是单酶切，在距离酶切位点300-500bp处的两端我分别设计引物做TAIL-PCR，产物都在1000bp以上，侧序后刨除那300-500bp 后，剩下的碱基就应该是整合在基因组上的序列才对啊，可是还是载体上的序列（比如扩增3‘，载体上的序列指的是5’的碱基），难道是酶切失败，还是说酶切后又自连，整个环状质粒载进去了。那如果是环状的质粒还能整合到基因组中吗？还能表达吗？
大家有没有遇到过这种情况啊？下一步我该怎么做呢？求大家帮帮我吧，现在是一点头绪也没有啦！
我说说我的理解，仅供参考：
你本来的意图，是通过载体线性化后，外源基因与基因组同源位点的双交换，将其整合入基因组中，对吗？
如果说是整个环状质粒导入基因组，从理论上来说是有可能的，单酶切就可以了，而且概率比双酶切还要高，虽然我们一般都用线性材料转基因。
如果想验证一下是不是质粒整合进入的，我觉得既然TAIL-PCR就是做染色体步查的，如果你有时间，再往前走一段看看。
不过如果是环状整合的话，基因组有很大一段插入，从理论上是不能表达了。
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探独峡呜 
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