有一篇文献中使用高氯酸同时提取DNA和RNA,具体步骤如下:取2mL0.5% 组织匀浆液,加入 1mL0.6mol/L冷高氯酸,冰上放置10min后500g离心10min, 弃上清,沉淀物用2mL0.2mol/L高氯酸洗涤两次,两次洗涤后都以500g离心l0min,弃上清,将沉淀物溶解于2mL0.3mol/L... 有一篇文献中使用高氯酸同时提取DNA和RNA,具体步骤如下:取2mL0.5%
组织匀浆液,加入 1mL0.6mol/L冷高氯酸,冰上放置10min后500g离心10min,
弃上清,沉淀物用2mL0.2mol/L高氯酸洗涤两次,两次洗涤后都以500g离心l0min,弃上清,将沉淀物溶解于2mL0.3mol/L的KOH,37℃条件下培养60min,然后加入1mL1.2mol/L高氯酸,冰上放置10min,500g离心15min,收集上清液(I),沉淀物用2mL0.2mol/L高氯酸溶解后再离心,再收集上清液(II),集中上清液(I和II)用于RNA浓度的测定,沉淀物用于测定DNA的浓度。
不知各位有没有用过这种方法,高氯酸的作用是什么?请赐教!
加入0.6mol/L冷高氯酸沉淀RNA和DNA。加入0.2mol/L稀高氯酸洗涤沉淀两次,除去磷蛋白、糖类、磷酯、核苷酸类辅酶和游离核苷酸等杂质,以免干扰核苷酸含量的准确测定。把沉淀物溶解于0.3mol/L的KOH,则RNA发生降解,DNA不发生降解。然后加1.2mol/L高氯酸酸化,离心,得上清液(I)为 RNA碱解液,沉淀物为未降解的DNA。再接着用高氯酸溶液洗涤沉淀物,离心,收集上清液(II)。集中上清液(I和II)即为R N A待测液。