高氯酸钠对于放线菌的dna提取有没有影响啊？我们已经提了几天都没有出现dna沉淀，不明白他有没有破坏作用。。。 方法如下：1.5~2g湿菌体，加入20ml 1×TES，充分打散菌体 ↓加入2mg溶菌酶 37℃水浴保温30-60分钟，温和摇动 ↓加入2ml 20% SDS (终浓度为2%)... 高氯酸钠对于放线菌的dna提取有没有影响啊？我们已经提了几天都没有出现dna沉淀，不明白他有没有破坏作用。。。 方法如下：1.5~2g湿菌体，加入20ml 1×TES，充分打散菌体
↓加入2mg溶菌酶
37℃水浴保温30-60分钟，温和摇动
↓加入2ml 20% SDS (终浓度为2%)
55℃水浴保温10分钟，然后冷却至室温
↓加入100μl蛋白酶K溶液
55℃水浴保温30-60分钟，温和摇动
↓加入5ml 5M NaClO4溶液
加入等体积(27ml) P:C:I混合液，充分振荡使其呈乳浊液，约30~60分钟
↓5000rpm，4℃，20-30分钟离心
用剪去枪尖的枪头吸取上层水相，转移至新的离心管中，重复用P:C:I抽提2-3次至没有蛋白膜出现为止
↓加入70μl RNase溶液
37℃水浴保温30-60分钟
↓
加入等体积的C:I混合液，充分振荡
↓5000rpm，4℃，20-30分钟离心
转移上层水相至烧杯中，冰浴，加入1/10体积预冷的3M NaAc-1mM EDTA-Na2及等体积的冷异丙醇，使DNA沉淀
↓用玻璃棒绕起DNA丝
望各位高手指点一二！！不胜感激。。
5ml 5M NaClO4溶液 是为了调节盐浓度DNA溶于高盐
55℃水浴保温10分钟，然后冷却至室温
↓加入100μl蛋白酶K溶液
55℃水浴保温30-60分钟，温和摇动
水浴60℃保持Z少1 h，不时摇动
你这步骤相信也是从书上抄来的 看看有没有抄错 如果是正规的教科书应该都是别人试过的 不会有问题的 不过相信这方法比较古老了 提取的效率不会太高的
你是高中生还是大学生?如果有条件的话可以用用以下方法 我们一般是这样提的每每成功的 不过Z后看到的不是DNA丝 是沉淀
用用SDS法
1. 研磨，加入0.4ml提取buffer，充分混匀。
提取buffer：0.4 M NaCl2， 10 mMTris-Cl(pH8.0)， 2 mM EDTA。
2. 加入0.04ml 20%的SDS（终浓度2%）、0.008ml 20mg/ml的蛋白酶K（终浓度400g/ml），充分混匀。
3. 水浴60℃保持Z少1 h，不时摇动， OR overnight 。
4. 随即加入0.3ml 6M的NaCl2，剧烈涡旋震荡30s。
5. 转速12000rpm离心10min。
6. 将上清转移入新的离心管中，加入等体积的异丙醇，混匀；放置-20℃保持1 h
7. 转速12000rpm离心10min，弃去上清，DNA沉淀用70%的乙醇洗1-2次。
8. 常温干燥、将残留乙醇挥发完，加入0.3ml ddH2O溶解DNA；可以立即用于PCR分析或放置-20℃保存。
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