首先将蛋黄均质放入带塞瓶中备用,称取一定量的均质蛋黄放入洁净的带塞三角瓶中,加入一定量的乙醇,搅拌30min后,静置一定时间;然后加入1/3乙醇用量的,搅拌15min后,静置相同的时间;接着过滤;滤渣进行二次提取,加入乙醇与的混合液(体积比为3:1),无需搅拌静置浸渍相同时间;第二次过滤,合并二次滤液,低温减压转蒸发浓缩至少量,加入一定量丙酮除杂,卵磷脂即沉淀出来,过滤,滤饼用丙酮冲洗几次,至到冲洗液无色,即得到卵磷脂
粗品,在真空干燥箱中干燥后,充入氮气低温保存。
柱层析分离纯化卵磷脂
将适量的柱硅胶(60~100目)用氯仿打成浆状,湿法装柱,准确称量卵磷脂粗品(EPC)2.63g用尽可能少氯
仿溶解后,倒入柱子内。用不同浓度梯度的氯仿/甲醇混合液连续冲洗(氯仿:甲醇分别用40:1、35:1、30:1、25:1、20:1、15:1、10:1、5:1、1:1、2:3、1:2、1:3),每个浓度以100ml总量分批加入,当加入氯仿/甲醇浓度为1:1时,以后的溶液加入量根据需要变大,即洗脱液梯度变化要慢些。根据柱中色带及薄层层析不停的检测收集液的结果,分开收集各种不同成份的洗脱液,把出现单一斑点,且在同一块薄层板上与标品卵磷脂有同一Rf值的洗脱液收集在一起,然后旋转蒸发浓缩成膏状,再在冻干机上干燥,即得我们所期望的纯白色的卵磷脂精品,充入氮气低温保存。
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