实验室“胡萝卜素植物色素的分离测定”

一、纸层析法
1.原理
以丙酮和石油醚提取食物中的胡萝卜素及其他植物色素，以石油醚为展开剂进行纸层析，胡萝卜素极性Z小，移动速度Z快，从而与其他色素分离，剪下含胡萝卜素的区带，洗脱后于450nm波长下定量测定。
2.适用范围
参照GB12389-90。本方法适用于植物性食物和含有植物性食物的混合食物中胡萝卜素的测定，其Z小检出限为0.11μg。
3.仪器和设备
（1） 实验室常用设备。
（2） 玻璃层析缸。
（3） 分光光度计。
（4） 旋转蒸发器：具150ml球形瓶。
（5） 恒温水浴锅。
（6） 皂化回馏装置。
（7） 点样器或微量注射器。
（8） 滤纸。
4.试剂
除特殊说明外，实验用试剂为分析纯，水为蒸馏水。
4.1 石油醚（沸程30～60℃）：同时是展开剂。
4.2 无水硫酸钠：分析纯。
4.3 5%硫酸钠溶液。
4.4 1+1氢氧化钾溶液：取50g氢氧化钾溶于50ml水。
4.5 无水乙醇：需脱醛处理。
（1） 检验乙醇是否含醛：
银氨液：加浓氨水于5%硝酸银液中，直至氧化银沉淀溶解，加入2.5mol/L氢氧化钠溶液数滴，如发生沉淀，再加浓氨水使之溶解。
银镜反应：加2ml银氨液于试管内，加入几滴乙醇摇匀，加入少许2.5 mol/L氢氧化钠溶液加热。如乙醇中无醛，则没有银沉淀，否则有银镜反应。
（2）脱醛方法：取2g硝酸银溶于少量水中，取4g氢氧化钠溶于温乙醇中，将两者倾入1L乙醇中，摇匀，静置一、两天，将上层清液倾入蒸馏瓶中，蒸馏，弃去初蒸的50ml。（注：蒸馏速度控制在1滴/秒。）
4.6 β-胡萝卜素标准贮备液：取5mgβ-胡萝卜素标准品，溶于10ml中，浓度约为500μg/ml，准确