Arnon方法的原理和具体步骤又是什么?要测定植物色素的含量用什么方法?具体步骤是什么?万分感谢阿!!... Arnon方法的原理和具体步骤又是什么?
要测定植物色素的含量用什么方法?具体步骤是什么?
万分感谢阿!!
可以用。
Arnon是传统的叶绿素测定方法,是将材料在80%丙酮溶液中研磨并经过滤或离心除去残渣后,测定提取液的光密度值来计算叶绿素含量,所以是使用分光光度计测量光的吸收值继而估算出色素的含量。二甲基亚砜(DMSO)直接浸提高等植物叶绿素,同样是测定提取液的光密度值来计算叶绿素含量,但步骤较为简省,但是对实验条件的控制要求较严格。呵呵!以下是大体的步骤:叶绿素的分子结构是由四个吡咯环组成的一个卟啉环,此外还有一个叶绿醇的侧键,由于分子具有共轭结构,因此可吸收光能。叶绿素是脂类化合物,所以它可溶于丙酮、石油醚、己烷等有机溶剂,用有机溶剂提取的叶绿素可在一定波长下测定叶绿素溶液的消光值,利用Arnon公式计算叶绿素含量。
二、材料、仪器与试剂
1.材料:菠菜叶片
2.仪器:分光光度计、天平、具塞刻度试管(15ml)、研钵、漏斗、滴管、滤纸、试管架。
3.试剂:丙酮、CaCO3
三、操作步骤
样品处理及测定:准确称取洗净,擦干(去叶片中脉)的菠菜叶片1.00g,于研钵中加少许CaCO3 研磨成匀浆,用80%丙酮浸提,将上清液过滤(滤纸先用80%丙酮湿润),用滴管吸取80%丙酮分次把研钵中叶绿素浸提液和残渣洗净,然后再用丙酮逐滴把滤纸上的叶绿素溶液洗净,全部转移到具塞刻度试管,定容到15ml,于652nm波长处测定消光值,如需测定叶绿素a和b的含量,可于663nm 和645nm波长处分别测定其消光值,按分式(2)或(3)计算。
四、结果计算
OD652
A= ×稀释倍数×100 (1)
34.5×W
式中:A:叶绿素含量(mg/100g);
W: 样品重(g )
Ca——0.0127×OD663-0.00269×OD645(2)
Cb——0.0229×OD645-0.00468×OD663(3)
Ca,Cb——分别代表叶绿素a和叶绿素b的含量(mg/ml)
五、注意事项
叶绿素是一种极不稳定的化合物,它能被活细胞中的叶绿素酶水解,脱去叶醇基,转变为叶绿酸。光照和高漫都会使叶绿素发生氧化和分解,因此在分离提取叶绿素的过程中,必须注意控制这些因素,尽可能在低温和弱光下进行,并注意缩短实验时间,以防止叶绿素的破坏。