两个荧光通道有些重合 怎么消除影响

证实两个蛋白在细胞膜上都有定位有许多种方法：
1，荧光报告基因：两个蛋白各自用荧光蛋白标记，比如GFP和RFP等，两者荧光光谱不可重叠，在共聚焦显微镜下在各自通道观察和merge后的图像分析，可见荧光重叠，即可证明共定位。
2，免疫荧光：要求两个蛋白都有抗体，或者带有不同的标签，如myc，flag等，然后用免疫组织化学的方法，做免疫荧光二抗双标，在共聚焦显微镜下，可以看到荧光共定位。
3，免疫电镜，同免疫荧光类似，二抗要用不同大小的胶体金标记的二抗，电镜下可以分辨是否共定位。
4，western：提取质膜后，用相应的抗体检测是否在质膜组分中可以同时检测到两种蛋白。